机能实验学课件：正常家兔磺胺嘧啶钠药动学参数的测定.ppt

*正常家兔磺胺嘧啶钠药动学参数的测定1.磺胺类抗菌药发展史磺胺类药物是叶酸合成抑制剂，早在1930年，就使用磺胺类药物治疗溶血性链球菌感染而成为第一个人类用于治疗全身感染的化疗药物。然而由于抗药菌株的出现、患者变态反应的发生和青霉素的问世，磺胺类药物的应用大大减少。20世纪70年代，磺胺类与甲氧苄啶的协同作用被发现以及磺胺甲噁唑与甲氧苄啶复方制剂的问世，使得磺胺类药物又在临床重新受到重视。2.磺胺类抗菌药的临床应用可用于治疗全身性感染、肠道感染、局部应用。可用于脑膜炎奈瑟菌所致的脑膜炎。3.基本的药动学参数（1）半衰期，t1/2：指血浆中药物浓度下降一半所需要的时间，t1/2=0.693/K；（2）表观分布容积：指理论上药物均匀分布应占有的体液容积，Vd=A/C；（3）消除速率常数（Ke）：指单位时间内消除药物的百分数。4.四种给药方式的血药浓度-时间曲线图掌握家兔动脉插管的手术过程；2.熟悉磺胺嘧啶钠血药浓度测定原理与测定方法；3.了解药动学参数的计算方法。Ⅰ.实验目的Ⅱ.实验药品:20%磺胺嘧啶钠30mg%磺胺嘧啶钠（标准液）5%三氯醋酸0.5%麝香草酚（用20%NaOH溶液配制）0.5%亚硝酸钠6.2N盐酸7.1%肝素（1ml/kg）8.20%乌拉坦（5ml/kg）Ⅲ.实验动物家兔，2.0～2.5kg.Ⅳ.实验设备家兔操作台手术器械手术刀大镊子止血钳弯头小镊子眼科剪刀玻璃钩Ⅳ.实验设备：3.动脉插管4.722型可见光分光光度计Ⅳ.实验设备：5.离心机Ⅴ.实验步骤：1.取家兔，称重，通过耳缘静脉给20%乌拉坦(5ml/kg).耳缘静脉注射如何确定家兔已经被完全麻醉呢?家兔同时出现以下三种体征:1.肌张力减弱；2.呼吸速率逐渐减慢；3.角膜反射消失。2.颈动脉剖开固定家兔头部、绑四肢；用弯剪清理颈部毛发；沿家兔解剖学正中线摸到颈部甲状软骨，用手术刀沿甲状软骨向下切开颈部皮肤5-7cm，血管钳钝性分离，暴露气管；游离气管一侧的颈总动脉，与周围组织及迷走、交感神经分离；为了防止凝血，由耳缘静脉注射1%肝素（1ml/kg）；颈总动脉下穿过两根手术线，一根线头端结扎，另一根线备用，心端用动脉夹夹住。眼科小剪刀近头侧结扎处下剪小口，插动脉插管，结扎，固定。3.空白血样品收集：从动脉插管放空白血0.5ml，用离心管收集，并摇匀。4.给药：向一侧耳缘静脉内注入20%的磺胺嘧啶钠（1ml/kg）5.血样品收集：在给药后每个时间点收集0.5ml血样。时间点：1、3、5、15、30、60、90、120min。※每次取血前，要先放2滴血再取，以免不同时间点的血样间产生污染。Ⅵ.试管实验本实验测定磺胺嘧啶钠的原理：显色原理：磺胺类药物在酸性溶液中，可使苯环上的氨基（-NH2）离子化生成铵类化合物（-NH3+），进而与亚硝酸钠起重氮反应，产生重氮盐（-N=N+-）。此重氮盐在碱性溶液中与酚类化合物如麝香草酚起偶联反应，生成橙红色的偶氮化合物。偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸光度，通过与标准品吸光度的比较及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：脱蛋白取空白血样与各时间点血样0.2ml，放入各离心管中并标记，每个离心管分别加水1.8ml(※标准管加水1.6ml)；另取30mg%磺胺嘧啶钠标准液0.2ml加入到标准管中，以配置标准血样品；各试管分别加入5%三氯醋酸4ml，并摇匀，然后1000rpm离心5min。2.重氮化及偶联呈色从各离心管提取上清2.0ml并转移至玻璃试管中试剂按照如下顺序添加：0.5ml2NHCl0.5ml0.5%NaNO21.0ml0.5%麝香草酚，然后摇匀。注意：加亚硝酸钠和加麝香草酚的顺序不要颠倒！3.分光光度计分析：每个样品的吸光度值由722型分光光度计测定，最大吸收波长设定于480nm.以空白血样品作为空白对照进行分光光度计调零。Ⅶ计算血药浓度偶氮染料的显色深浅与磺胺的浓度有关。可用光度计测出其吸光度值，通过与标准品吸光度值的比较及运算，即可推算出磺胺的浓度。计算公式如下：Ⅷ实验结果Table1.结果记录表Ⅷ实验结果1.以时间为横坐标，浓度的对数为纵坐标，在半对数图上绘制磺胺嘧啶钠的