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聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤
聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤如下:
清洗电泳仪和电泳板。
准备实验用液,将需要的磷酸缓冲液和聚丙烯酰胺溶液以及添加的阳离子表面活性剂混合均匀。
调节电泳仪的温度、电压、时间等参数。
垂直安装电泳板,将电泳板安装在电泳支架中,保证其处于垂直位置。
将溶液添加到电泳板,并将电泳板放入电泳仪中进行实验,注意实验过程中溶液的变化,以便及时调节电泳仪参数。
实验完毕后取出电泳板,用纸巾擦拭干净,重复上述实验步骤,直至所有实验完毕。
染色及脱色,电泳后的凝胶条在1%氨基黑10B在7%醋酸溶液中固定并染色1小时以上。染色后的凝胶条用7%醋酸洗涤数次。置于脱色玻管中,在同一电泳装置中电解脱色。此时改用7%醋酸充装在液槽中。通电后过剩凝胶之上再加一层大孔凝胶,样品聚合在最后的另一层凝胶中。在我们的试验中省略的染料泳向正极。脱色时电场强度25V/cm,电流10-15mA/管。3-4小时脱色完毕。有色的醋酸溶液通过盛有活性炭的漏斗过滤,即可除去染料,重新使用。
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