胚胎发育学课件.ppt

一、切片的制作

1、切片的种类取材切片、涂片、铺片、压片、磨片等；切片石蜡切片、冰冻切片、火棉胶切片；连续切片、整装片

2、切片的制作取材固定（浸蜡、包埋）切片染色透明封固等next

固定液单一固定液复合固定液—长处突出，短处抵消

染色液

染色方法常用染色方法Mallory’s三色染色铁矾苏木精染色尼氏体染色镀银法——上皮界限、网状纤维、神经细胞全貌（Golgi简易法）、神经细胞（石蜡切片法）镀金法——运动终板特殊组分染色法Feulgen反应—示DNAPyronine法—示RNAPAS法—糖元碱性磷酸酶Gomoni法（钴）

透明剂二甲苯（XYL）甲苯苯氯仿香柏油

二、切片观察

观察重点一早期卵裂—斑马鱼＆蛙胚未受精卵?合子期胚胎?分裂期胚胎?囊胚（?原肠胚?器官形成期）；原肠化—蛙胚背唇、腹唇、瓶状细胞（早）；原肠腔vs囊胚腔（早中晚）；卵黄栓（晚）；神经胚—蛙胚神经板、脊索、原肠腔、中胚层；神经管、神经嵴、（体腔）、外胚层；器官形成—鸡胚附：1、3mm蛙胚连续切片；2、鸡胚原条期切片。

观察重点二：

鸡胚发育过程整装片及切片1、未孵化鸡胚（处于囊胚期）切片2、原条期（孵育16小时）切片明区，暗区，原条，原结，原窝3、19小时鸡胚整装片4、孵育1天的鸡胚整装片（四个体节）明区，暗区，前羊膜，神经褶，四对体节，脊索，退缩的原条5、33小时鸡胚整装片前脑，视泡，中脑，菱脑，心脏，体节，神经管6、孵育3天鸡胚整装片端脑，间脑，中脑，后脑，听泡，尿囊，心脏，尾，体节

观察重点三：

鸡胚活体标本的形态结构特征2Dpf鸡胚气室、卵壳膜、胚盘等7～8Dpf鸡胚1、观察四种胎膜(卵黄囊、羊膜、尿囊、绒毛膜)，胚胎的外形，卵黄囊是否完全包住卵黄？尿囊的大小？2、羊膜大小。3、眼睛、喙、四肢、指和趾的分化。next

三、整装片制作

实验材料、仪器及药品受精的鸡蛋(白来航——2Dpf）恒温箱、检卵灯、温度计、湿度计；染色缸、药匙、镊子、吸管、废液缸、解剖剪、玻璃皿、％生理盐水、卡氏固定剂、95％酒精、酒精洋红、100％酒精、甘油、载玻片、盖玻片等

2Dpf鸡胚整装片制作流程

上下临时制片取材→0.9%的生理盐水冲洗→卡氏固定液，5’~10’→95％酒精，2’→酒精洋红，20’~30’→95％酒精，2分钟→100％酒精，2’(*2)→100％甘油封片永久制片→1：1的100％（酒精：二甲苯）10’→二甲苯10’→树胶封片

附：

1、蛙卵的获得

2、鸡的孵化整装片制作结束

斑马鱼胚胎早期发育图谱

爪蟾的人工受精人工受精—催青1、激素催青—绒毛膜促性腺激素（HCG）；12小时2、垂体提取液催青步骤1、区分爪蟾的雌雄—雌：大；雄：婚爪垫；2、催青、抱对；3、精子悬浮液制备—处死4、取卵与人工受精—挤压5、体外受精

蛙胚早期卵裂

蛙原肠胚

蛙神经胚

鸡卵的人工孵育选蛋孵化前消毒—0.01%高锰酸钾、水温40℃，擦拭孵化——21天1、温度—37.8℃（36.5℃～38.5℃）2、湿度—40～70%3、通风4、翻蛋—30～40次vs3～5次/天5、晾蛋6、照蛋5～6天—无精蛋、裂纹蛋；11天—死胚蛋；21天—死胚蛋、破壳蛋

未孵化鸡胚

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3Dpf鸡胚—器官原基

8Dpf鸡胚—胚外结构

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鸡蛋的结构1蛋壳；2气室；3内壳膜；4外壳膜；5系带层蛋白；6胚盘；7卵黄；8卵黄膜；9浓蛋白；10稀蛋白；11脐带；12潘氏核；13卵黄心颈部；14卵周隙；15卵黄心；16白卵黄层；17黄卵黄层

鸡的胚外结构(下次选择另一幅图吧，4张的那组)

谢谢！