Qiagen基因组提取试剂盒中文操作说明.pdfVIP

Qiagen基基因因组组提提取取试试剂剂盒盒中中⽂⽂操操作作说说明明

QIAampDNABloodMiniKit简介：

QIAGEN公司出品的QIAampDNABloodMiniKit适⽤于使⽤微型离⼼机真空处理从全⾎、⾎浆、⾎清、⾎沉、淋巴细胞以及体液样品中提取

总(基因、线粒体和病毒)DNA。该试剂盒可处理带有EDTA、柠檬酸盐和肝素等常规抗凝剂的新鲜冷冻的全⾎样本，样品量可达200µl。整套

基因组的操作时间约为20–40分钟，⼀般可从200µl健康全⾎中获得4–12µgDNA，洗脱体积可在50–200µl范围。

抽提原理：

样品中的DNA可以特异性结合到QIAamp的硅胶膜上，通过两次洗涤可以将CR抑制剂，如：⼆价阳离⼦和蛋⽩完全去除，最后结合在离⼼柱上

的纯核酸可⽤⽔试剂盒中的缓冲液进⾏洗脱收集。

开始前的注意事项：

1.所以的离⼼步骤需要在室温（15-25℃）进⾏

2.如果样品中含有的基因组当量少于10000，请添加载体DNA（carrierDNA）

3.200µl全⾎样品可以得到约3-12µgDNA

开始前的准备⼯作：

1.将样品平衡到室温（15-25℃）

2.将⽔浴是⾦属浴加热到56℃，以备第4步使⽤

3.将BufferAE蒸馏⽔平衡到室温，⽤于第11步的洗脱

4.确保BufferAW1、AW2以及QIAGEN蛋⽩酶已经按照说明配置完毕

5.如果在BufferAL中出现沉淀物，请在56℃孵育使其溶解

操作步骤：

以下为整个基因组提取操作的流程图，由于真空装置并⾮所有的实验室都配置，所以这⾥介绍的是离⼼法（流程图左侧）。以下译介

⾃QIAGEN官⽅出品的说明部分，⿊粗体为实验操作的主体部分。

1.吸取20µlQIAGEN蛋⽩酶（者蛋⽩酶K）⾄1.5ml离⼼管的底部。

2.加⼊200µl待提取基因组的样品⾄离⼼管中。可以加⼊不超过200µl的全⾎、⾎浆、⾎清、⾎沉棕黄层，者溶于200µlBS中不超过5*106的

淋巴细胞。

如果样品体积不⾜200µl，请使⽤BS补⾜。前两步的顺序也可以调换，即将蛋⽩酶加⼊样品中，但此时需要注意充分混匀。

3.加⼊200µlBufferAL⾄样品中，涡旋振荡15s混匀。完全混匀以得到均⼀化的溶液对于保证样品的充分裂解⾮常重要

如果样品体积⼤于200µl，请等量增加蛋⽩酶和BufferAL的量。⼤体积样品推荐使⽤MidiMaxi试剂盒。操作时注意，请不要将QIAGEN蛋⽩酶

（蛋⽩酶K）直接加⼊BufferAL中。

4.56℃孵育10min。DNA得率在该条件下已经达到最⼤值，延长孵育时间不会进⼀步提⾼得率。

5.快速离⼼，去除残留在1.5ml离⼼管盖⼦中的液滴。

6.加⼊200µl（样品等体积）的⼄醇（96-100%），涡旋振荡15s混匀。振荡完毕后，快速离⼼，去除残留在1.5ml离⼼管盖⼦中的液滴。

7.将步骤6得到的混合物转移⾄QIAampMini离⼼管柱(在⼀个2ml的收集管中)注意不要弄湿边缘的环。扣上盖⼦（在离⼼过程中关闭每个离⼼

管的盖⼦以防⽌离⼼过程中产⽣⽓溶胶），6000g（8000rpm，选择低速离⼼的⽬的是减少噪⾳，使⽤更⾼的转速不会影响DNA最终的得率和

纯度，在样品为⾎沉者淋巴细胞时，推荐使⽤最⾼转速以防⽌堵塞）离⼼1min。将QIAampMin离⼼柱放⼊⼀个新的⼲净2ml接收管中（已提

供），将滤液连同使⽤过的收集管丢弃。

8.⼩⼼打开QIAampMini离⼼柱，加⼊500µlBufferAW1（注意不要将边缘环弄湿）。盖紧盖⼦，6000g（8000rpm）离⼼1min。将QIAamp

Mini离⼼柱转移⾄⼀个新的2ml收集管中（已提供），将滤液连同使⽤过的收集管丢弃。即使最初加⼊的样品量⼤于200µl，此步也不需要增

加BufferAW1的⽤量。

9.弃滤液，⼩⼼打开QIAamp