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免疫电镜专题知识讲座;细菌，冰冻超薄切片，免疫标识腺苷酸环化酶，醋酸铀染色;免疫电镜专题知识讲座;;免疫电镜要处理两个问题;ξ1低温包埋超薄切片法制备免疫电镜标本;固定剂;固定液;取材
FA+GA固定液中4°C2~3h(中间1-2h可取出修块)
封闭游离醛基（0.5MNH4Clin0.1MPB）4°C2h
冲洗（0.18M蔗糖in0.1MPB）4°C2h或过夜中间换液2~3次
*常规电镜标本可在冲洗液中存放1~2周，但免疫电镜标本不行，因为GA浓度很低微细结构改变大
;2脱水;脱水剂反抗元灭活作用随温度降低，但不能低到脱水剂结冰温度，所以应选择结冰温度低脱水剂
预先冷却好全部用具;3浸透与包埋;包埋剂;常规与免疫电镜包埋剂比较;称量要准确，尤其量少
胶拌时防止产生气泡（O2自由基聚合阻聚剂）
使用无色透明胶囊（无色明胶或聚酯胶囊）
包埋剂加满加盖
用具全部预先冷却;免疫电镜专题知识讲座;紫外照射聚合箱;4切片;5免疫标识;6免疫标识后染色;ξ2冰冻超薄切片法制备免疫电镜标本;1取材与固定;*固定时间越长，结构保留越好，抗原活性保留越差
*对于可溶性物质（细胞溶质，分泌蛋白）需加GA以防止免疫反应过程中可溶性物质被抽提
*对于膜或细胞骨架上物质而言，可溶性物质被抽提有利于膜或细胞骨架上物质接触免疫标识物
;2冷冻保护;3冷冻;4冰冻超薄切片;;;2%明胶(in0.1MPB)
吸走蔗糖,降低背景
等候免疫标识（存几个小时）;免疫标识过程中，切片面浸湿，载网后面干燥
载网浮在液滴上;6免疫标识后染色;7甲基纤维素包埋;;ξ3电镜下显示抗体标识物—胶体金
;;溶胶主要特征：微小颗粒，颗粒越大越不稳定
胶体金：1~100nm(80nm红，80nm兰)
制备：
工业
试验室HAuCl4+（单宁酸+柠檬酸钠）
Au;胶体金优点;胶体性质;2胶体金-抗体复合物制备;最适pH：在靠近或略高于抗体等电点时复合物最稳定（高0.1~0.2pH）
查抗体等电点
IgG，最适pH=9.0~9.2
PA,最适pH=5.9~6.2
普通抗体pH在透析时调好
胶体金pH用稀酸碱调
（0.1MHCl,0.2MKCO3）
*pH测定：重金属会阻塞电极，用pH纸或先在胶体金中加入2~3滴1%乙二醇（Mw20,000）后在测
;最适蛋白量：;最小蛋白量：找到??体金颜色（红）刚开始改变（紫）试管，其前一管为最小蛋白量
最适蛋白量：（１＋１０％）最小蛋白量
;IgG-胶体金复合物制备;ξ4免疫电镜试验设计;亲和标识：抗原——抗体
激素——受体
糖基——植物凝集素
免疫标识：一抗标识法，二抗标识法，
PA法，PG法，
其它分子桥技术（如生物素与
抗生素蛋白）;包埋后法免疫标识程序;;电镜细胞化学
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