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欧前胡素对高脂诱导的卫星胶质细胞损伤的保护作用研究.pdf

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摘要

摘要

研究背景:

随着肥胖患者日渐增多,肥胖现已成为一个非常严重的世界性健康问题。

外周神经系统神经节内的神经元通常被卫星胶质细胞(Satelliteglialcells,SGCs)

完全包围着,肥胖状态下,激活的SGCs会释放细胞因子,如白介素-1β

Interleukin-1β,IL-1β-αTumornecrosisfactor-α,TNF-α

()和肿瘤坏死因子(),

这些炎性因子由SGCs释放后能扩散到SGCs邻近的神经元,增加神经元的兴

奋性,进而传递伤害性信号。P2X4受体在星状神经节和背根神经节(Dorsal

rootganglionDRG

,)的卫星胶质细胞中广泛存在,并参与损伤性信号的传递。

欧前胡素(Imperatorin,IMP)是一种呋喃香豆素,已被证明具有多种药理学作用,

例如抗炎、心脏保护作用。我们实验室前期研究发现欧前胡素可以通过下调肥

胖大鼠星状神经节中SGCs上的P2X4受体的表达来改善肥胖诱导的心交感神

经病理损伤。但目前欧前胡素对离体培养高脂诱导的SGCs损伤的保护作用及

其可能的机制尚不清楚,还需深入研究。

目的:

本实验通过高脂共培养背根神经节SGCs建立细胞损伤模型开展研究,在细

胞水平上研究P2X4受体介导高脂引发的SGCs损伤的机制,并观察欧前胡素

对P2X4受体介导高脂诱导的SGCs损伤的影响及可能机制,为肥胖及相关代

谢综合征的防治探索新方法。

方法:

实验分组:SGCs正常对照组(Ctrl组);欧前胡素处理组(IMP组);高

脂处理组(HF组);高脂+欧前胡素处理组(HF+IMP组);高脂+P2X4shRNA

HF+P2X4shRNA+NCshRNAHF+NCshRNA

处理细胞组(组);高脂处理组(

组)。

实验内容:

1SGCsGlialfibrillary

()免疫荧光法检测培养细胞胶质纤维酸性蛋白(

acidicprotein,GFAP)表达情况以及原代卫星胶质细胞纯度鉴定。

II

摘要

(2)高脂浓度筛选:通过CCK-8法检测不同高脂浓度处理组(0.2mM、

0.4mM0.6mM0.8mM1.0mM24h48h

、、、)以及细胞处理时间分别为和对

细胞存活率的影响并筛选出最合适的建模浓度。

(3)欧前胡素浓度筛选:通过CCK-8法检测不用欧前胡素浓度(1μM、

10μM100μM1000μM24h

、、)处理对细胞存活率的影响,筛选出欧前胡素

0

的给药浓度范围;然后以筛选出的高脂浓度为模型设置欧前胡素浓度梯度(

μM、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM),通过CCK-8法筛选出欧前胡

素的给药浓度。

4CCK-8SGCsCtrl

()法检测欧前胡素对高脂诱导的

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