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摘要
摘要
研究背景:
随着肥胖患者日渐增多,肥胖现已成为一个非常严重的世界性健康问题。
外周神经系统神经节内的神经元通常被卫星胶质细胞(Satelliteglialcells,SGCs)
完全包围着,肥胖状态下,激活的SGCs会释放细胞因子,如白介素-1β
Interleukin-1β,IL-1β-αTumornecrosisfactor-α,TNF-α
()和肿瘤坏死因子(),
这些炎性因子由SGCs释放后能扩散到SGCs邻近的神经元,增加神经元的兴
奋性,进而传递伤害性信号。P2X4受体在星状神经节和背根神经节(Dorsal
rootganglionDRG
,)的卫星胶质细胞中广泛存在,并参与损伤性信号的传递。
欧前胡素(Imperatorin,IMP)是一种呋喃香豆素,已被证明具有多种药理学作用,
例如抗炎、心脏保护作用。我们实验室前期研究发现欧前胡素可以通过下调肥
胖大鼠星状神经节中SGCs上的P2X4受体的表达来改善肥胖诱导的心交感神
经病理损伤。但目前欧前胡素对离体培养高脂诱导的SGCs损伤的保护作用及
其可能的机制尚不清楚,还需深入研究。
目的:
本实验通过高脂共培养背根神经节SGCs建立细胞损伤模型开展研究,在细
胞水平上研究P2X4受体介导高脂引发的SGCs损伤的机制,并观察欧前胡素
对P2X4受体介导高脂诱导的SGCs损伤的影响及可能机制,为肥胖及相关代
谢综合征的防治探索新方法。
方法:
实验分组:SGCs正常对照组(Ctrl组);欧前胡素处理组(IMP组);高
脂处理组(HF组);高脂+欧前胡素处理组(HF+IMP组);高脂+P2X4shRNA
HF+P2X4shRNA+NCshRNAHF+NCshRNA
处理细胞组(组);高脂处理组(
组)。
实验内容:
1SGCsGlialfibrillary
()免疫荧光法检测培养细胞胶质纤维酸性蛋白(
acidicprotein,GFAP)表达情况以及原代卫星胶质细胞纯度鉴定。
II
摘要
(2)高脂浓度筛选:通过CCK-8法检测不同高脂浓度处理组(0.2mM、
0.4mM0.6mM0.8mM1.0mM24h48h
、、、)以及细胞处理时间分别为和对
细胞存活率的影响并筛选出最合适的建模浓度。
(3)欧前胡素浓度筛选:通过CCK-8法检测不用欧前胡素浓度(1μM、
10μM100μM1000μM24h
、、)处理对细胞存活率的影响,筛选出欧前胡素
0
的给药浓度范围;然后以筛选出的高脂浓度为模型设置欧前胡素浓度梯度(
μM、10μM、20μM、40μM、80μM、160μM),通过CCK-8法筛选出欧前胡
素的给药浓度。
4CCK-8SGCsCtrl
()法检测欧前胡素对高脂诱导的
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