病毒的结构与功能.pptxVIP

病毒的结构与功能前 言1935年Stanley提纯结晶TMV后，研究者才开始对病毒的化学本质进行研究简单vs.复杂研究病毒结构和化学组成的意义形态、结构、组成及功能为控制与消除危害、为预防和治疗疾病提供依据和措施人工改造促进分子生物学发展病毒的生物学特性研究静态研究：性质研究（组成、形态、结构、理化、血清学）动态研究：感染、复制、遗传、变异及与宿主互作第一节 病毒纯化一、病毒的纯化标准感染性均一性检查方法–电镜观察–超速离心–电泳–免疫学方法二、病毒纯化的原理–具有普通蛋白质的性质，可以用分离纯化蛋白质的方法来纯化病毒体–具有特定的大小、形态、密度、沉降性质，可使用超过滤法、超离心法来分离纯化病毒三、病毒纯化的方法起始材料：丰度要求组织、脏器、细胞：破碎（方法？）培养液、尿囊液（一）超离心差速离心密度梯度离心–速率区带离心–平衡区带离心（如下图）PurificationofRecombinantAdenovirusbyDoubleCesiumChlorideGradient（二）电泳在一定的PH环境中病毒颗粒与杂质颗粒之间，或者不同的病毒颗粒之间可能带有不同的表面净电荷，从而在一定强度的电场中表现出不同的泳动速率，因而可以利用电泳方法把它们相互分离开来。因每次所处理的样品量很少，所以一般只为一些特殊研究目的所采用。流程：浓缩—电泳—电泳条带—洗脱—超速离心（三）沉淀法用以蛋白质提纯的盐析、等电点沉淀和有机溶剂沉淀等方法，都适用于病毒的浓缩、纯化。盐析等电点沉淀有机溶剂沉淀（四）酶处理蛋白酶（胰酶、胰凝乳蛋白酶，木瓜酶等）和核酸酶（DNA酶、RNA酶）处理病毒粗制品，然后离心将病毒体与宿主蛋白质和核酸酶的酶降解产物分开，可得到纯化的病毒制品。（五）吸附法使病毒首先吸附在某些具有吸附性能力的物质上，然后再将其洗脱下来，借此达到浓缩和提纯病毒的目的。常用的吸附剂有磷酸铝、磷酸、氢氧化铝以及高岭土、硅藻土和活性炭等。细胞吸附。（六）液态两相分配方法根据细小颗粒在两个互不相溶的液相之间的不等分配所建立的分离体系（七）层析技术凝胶过滤层析离子交换层析疏水层析亲和层析四、病毒纯化应注意的问题保持病毒的感染性选用适宜的纯化实验的起始材料无其他病毒污染含高丰度目标病毒少含杂质，易于除去根据具体情况选择提纯方法建立灵敏的病毒鉴定和测定方法第二节 病毒的化学组成前言成熟的病毒颗粒主要是由一种或几种蛋白质以及一种核酸（DNA或RNA）组成，只有少数几种例外，它们仅以裸露的核酸形式存在，不含蛋白质、外壳，如类病毒。大多数病毒的核酸都位于病毒颗粒的中心，形成病毒核心，病毒的蛋白质主要构成病毒的衣壳，把病毒的核酸包裹在中心。有些病毒核衣壳外面包裹一层囊膜，有脂质、蛋白质和糖组成。病毒的化学组成差异很大。（表3-1）一、病毒的核酸（一）病毒的核酸病毒含有RNA或DNA，它们是以单链、双链或环状多核苷酸组成。（二）病毒核酸组成和含量一般情况下，病毒核酸的含量和分子量的差异与病毒的结构有关，结构复杂的病毒，往往核酸的含量较多，而结构简单的病毒，则核酸的含量较小。病毒的核酸含量病毒核酸的分子量（三）病毒核酸的碱基组成与细胞核酸一样某些病毒含有异常碱基（四）病毒基因组的结构特征I、病毒RNA的结构与类型（I）病毒RNA的结构特征?以RNA携带全部遗传信息?分段基因组?环状RNA?5’端共价结合蛋白?病毒RNA末端具有帽子结构?3’末端有一个多聚腺苷酸结构?3’端具有与细胞tRNA相同的结构?重叠基因现象（II）病毒RNA的类型病毒RNA分段基因组?分段的dsRNA （＝＝＝＝=）?分段的侵染性线状正链RNA （－－－－－）多分体病毒：两分体病毒、三分体病毒和多分体病毒?分段基因组的非侵染性单链RNA非分段的病毒RNA基因组包括病毒的dsRNA、侵染性单链RNA、非侵染性单链RNA、逆转录病毒RNA和其它病毒RNAII、病毒DNA的结构与类型（I）病毒DNA的结构特征?粘性末端（conesireend）?末端重复（Terminalredundancy）?倒转的末端重复序列（mvertedrepeats）?循环排列（circularpermutataion）?基因与基因之间具有隔离区：ΦX174（217bp/5365bp）-病毒DNA所特有-调控表达：RNA聚合酶结合位点、转录终止信号、核糖体结合位点?具有基因重叠现象：ΦX174（重叠区22%）（II）病毒DNA的结构类型?单链的DNA病毒：线状单链DNA，环状单链DNA?双链DNA病毒：线状双链DNA（大多病毒）、环状双链DNA（共价闭合环状双链DNA（乳多空、SV40