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生物药剂学与药物动力学实验

实验一药物在体小肠吸收实验

一、实验目的

1.以磺胺嘧啶为模型药物，掌握大鼠在体肠道灌流法的基本操作和实验方法。

2.掌握药物肠道吸收的机理及吸收速度常数（?k?a?）与吸收半衰期[?t?1/2（a）?]的计算方法。

二、实验原理

药物消化道吸收实验方法可分为体外法（?invitro?）、在体法（?insitu?）和体内法（?invivo?）。在体法由于不切断血管和神经，药物透过上皮细胞后即被血液运走，能避免胃内容物排出及消化道固有运动等生理影响，是一种较好的研究吸收的方法。但本法一般只限于溶解状态药物，并有可能将其他因素引起药物浓度的变化误认为吸收。

消化道药物吸收的主要方式为被动扩散。药物服用后，胃肠液中高浓度的药物向细胞内透过，又以相似的方式扩散转运到血液中。这种形式的吸收不消耗能量，扩散的动力来源于膜两侧的浓度差。药物转运的速度可用Fick’s扩散定律描述：

式中，??为扩散速度；?D?为扩散系数；?A?为扩散表面积；?k?为分配系数；?h?为膜厚度，?C?GI?为胃肠道中药物浓度；?C?为血药浓度。在某一药物给予某一个体的吸收过程中，其?D?、?A?、?h?、?k?均为定值，可用透过系数?P?来表示，即??。

当药物口服后，吸收进入血液循环中的药物，随血液迅速地分布于全身。故胃肠道中的药物浓度（?C?GI?）远大于血中药物浓度（?C?），则上式可简化为：

上式表明药物被动转运（简单扩散）透过细胞膜的速度与吸收部位药物浓度的一次方成正比，表明被动转运速度符合表观一级速度过程。若以消化液中药量（?X?a?）的变化速度??表示透过速度，则：

式中，?k?a?为药物的表观一级吸收速度常数。对上式积分后两边取对数：

式中，?X?a?为?t?时间消化液中药量；?X?0?为零时间消化液中药量。以lg?X?a?对?t?作图可得一直线，由此直线斜率即可求出药物的吸收速度常数，并可计算吸收半衰期：

本实验以磺胺嘧啶为模型药物，进行大鼠在体小肠吸收试验。

三、仪器与材料

仪器：蠕动泵、紫外-可见分光光度计、恒温水浴、离心机、注射器、眼科剪刀、眼科镊子、手术刀片等。

材料：0.1%亚硝酸钠、0.5%氨基磺酸铵、0.1%二盐酸萘乙二胺溶液、1mol/L盐酸溶液、0.2mol/L氢氧化钠溶液、10mg/mL戊巴比妥钠溶液、生理盐水等。

四、实验内容

（一）试剂的配制

1.Krebs-Ringer试剂（pH值7.4）?称取氯化钠7.8g，氯化钾0.35g，氯化钙0.37g，碳酸氢钠1.37g，磷酸二氢钠0.32g，氯化镁0.02g，葡萄糖1.4g，加蒸馏水定容至1000mL。

2.供试液?精密称取磺胺嘧啶（SD）20mg，酚红20mg，加少量蒸馏水混悬，加入1%碳酸钠溶液使溶解，再用Krebs-Ringer试剂定容至1000mL，摇匀。

3.酚红液?精密称取酚红20mg，加少量蒸馏水混悬，加入1%碳酸钠溶液使溶解，再用Krebs-Ringer试剂定容至1000mL，摇匀。

（二）实验步骤

1.蠕动泵流速的调节?打开蠕动泵电源，选择所需工作的方向，按动快、慢档开关，调节流速为5mL/min和2.5mL/min。

2.恒温水浴调节?将水浴温度调节为37℃±0.5℃。

3.供试液的准备?取80mL供试液加入循环装置的烧瓶中，见图16-1，将烧瓶置恒温水浴中预热至37℃±0.5℃。

4.生理盐水的准备?取生理盐水适量，预热至37℃备用。

5.大鼠麻醉?取实验前禁食一夜、体重约200g的雄性大鼠一只，称重；腹腔注射戊巴比妥钠（剂量为40mg/kg），麻醉后背位固定于固定台上。

6.小肠插管?沿腹中线打开腹腔（约3cm）。自十二指肠上部及回肠下部各剪开一个小口，插入直径约0.3cm的玻璃管，用线扎紧。

7.洗涤肠管?用注射器将37℃的生理盐水缓缓注入肠管，洗净肠管内容物。

8.做成回路?将肠管两端的玻璃管按图16-1所示与胶管连接，作成回路，开动蠕动泵，流速为5mL/min。

9.取样?以5mL/min的流速循环10min后，将流速调至2.5mL/min，立即自供试液烧瓶中取样两份（1mL和0.5mL各一份），分别作为SD和酚红零时间样品，另向烧瓶中补加1.5mL酚红溶液；其后每隔15min按同法取样并补加酚红液，取样至120min（共9次），停止循环。

图16-1大鼠在体小肠回流实验装置

1.蠕动泵；2.温度计；3.水浴；4.循环液；5.大鼠

（三）含量测定

1.标准曲线的制备

（1）制备SD标准曲线吸取SD供试液（20μg/mL）2、4、6、8、10mL分别置10mL量瓶中，用Krebs-Ringer试剂定容。再分别吸取上液1mL置10mL具塞试管中，加1mol/L盐酸溶液5mL，摇匀；加0.1%亚硝酸钠溶液1mL，