流式细胞仪检测凋亡和细胞周期.ppt

第30页，课件共58页，创作于2023年2月第31页，课件共58页，创作于2023年2月二）肿瘤诊断与抗肿瘤药物研究第32页，课件共58页，创作于2023年2月1.肿瘤诊断DNA异倍体的出现是癌变的一个重要标志细胞的增殖能力的大小也可反映肿瘤的生物学特征利用流式细胞仪进行细胞周期分析和DNA倍性分析，辅助肿瘤诊断，包括监测癌前病变、肿瘤的早期诊断和肿瘤细胞学诊断。第33页，课件共58页，创作于2023年2月2倍体异倍体4倍体肿瘤组织中的各种DNA倍体第34页，课件共58页，创作于2023年2月第35页，课件共58页，创作于2023年2月2.凋亡研究在G0/G1峰前出现一个亚二倍体峰，即凋亡峰。检测调亡，可进行抗肿瘤药物研究和某些因素对细胞的损伤机理的研究。第36页，课件共58页，创作于2023年2月第37页，课件共58页，创作于2023年2月AnnexinVAssay

第38页，课件共58页，创作于2023年2月图AnnexinV/PI双标记分析细胞凋亡和坏死第39页，课件共58页，创作于2023年2月Dateacquired:14-Jan-03File:7Gy4hr.001Source:dongboDIPLOID:100.00%DipG0-G1:73.12%at48.16DipG2-M:9.59%at96.33DipS:17.29%G2/G1:2.00Dip%CV:6.04Apoptosis:13.66%Mean:27.48图FCM测试细胞周期分布和凋亡第40页，课件共58页，创作于2023年2月根据凋亡细胞的特点来检测在形态上，早期细胞核固缩，染色体边集在核膜内侧显新月体形、核碎裂；细胞浆和细胞器密度增高、细胞体积变小；细胞膜皱折卷曲，但早期细胞膜的完整性未受到破坏凋亡细胞的FSC？SSC？细胞坏死时，细胞肿胀，FSC？，SSC？第41页，课件共58页，创作于2023年2月第1页，课件共58页，创作于2023年2月什么是流式细胞仪●流式细胞仪实物BDFACSVantageBD-Calibur第2页，课件共58页，创作于2023年2月1.发展历史1934Moldavan1973Steinkamp一、??概述第3页，课件共58页，创作于2023年2月2.定义：对在高速流动的鞘液包括下对特异荧光标记的细胞、粒子进行分析和分选的技术.3.特点测量速度快，每秒钟能测数千个乃至上万个细胞可进行多参数测量在分析的同时可把具有指定特征的细胞分离出来，即分选技术。第4页，课件共58页，创作于2023年2月凡是能被荧光素标记的细胞或颗粒都可用流式细胞仪检测。前提这种荧光素能被流式细胞仪所配置的激光光源激发在生物检测技术中流式细胞仪是不可多得的一机多用的仪器。4.应用范围第5页，课件共58页，创作于2023年2月二、流式细胞仪的工作原理和基本结构待测细胞以单个细胞的悬液，经特异性荧光染料染色，放入样品管，吸入流动室。流动室充满鞘液，作用：约束样品在喷嘴中心，防止样品靠近喷孔壁堵塞喷孔。细胞排成单列由喷嘴中心喷出，形成细胞液柱。液柱与激光束相交，细胞上的荧光染料被激发产生荧光。荧光信号变成电信号输出到计算机，软件分析。第6页，课件共58页，创作于2023年2月第7页，课件共58页，创作于2023年2月基本结构流动室和液流系统；激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统。第8页，课件共58页，创作于2023年2月三、流式细胞仪可检测到的细胞参数

非荧光信号颗粒度细胞大小前向角散射光（FSC）细胞相对大小及其表面积侧向角散射光（SSC）细胞颗粒度及细胞内细胞器的相对复杂性第9页，课件共58页，创作于2023年2月血液涂片第10页，课件共58页，创作于2023年2月外周全血细胞散射光双参数点图第11页，课件共58页，创作于2023年2月荧光信号荧光强度（FL）：细胞上的荧光染料被激光激发后发射出的荧光，不同的荧光染料其发射波长不同。有荧光标记的细胞与无荧光标记的区分开来（阴阳）高FL细胞与低FL细胞区分开来（强弱）一般的流式细胞仪只装有一个激光光源（488nm），可测出三个FL，即FL1、FL2、FL3，大型的流式细胞仪装有两个或三个激光光源（488nm、633nm和325nm），可测出6个FL。第12页，课件共58页，创作于2023年2月荧光信号与细胞特性