体液蛋白质检验.ppt

脑脊液蛋白质测定脑脊液蛋白质来源:外源:经脉络膜的毛细血管壁超滤生成的内源:由中枢神经系统合成的脑脊液特有蛋白质.第55页，课件共82页，创作于2023年2月检测方法1.磺基水杨酸-硫酸钠比浊(SS-S)法2.邻苯三酚红钼络合显色法目的对改良的磺基水杨酸-硫酸钠比浊(SS-S)法测定脑脊液蛋白进行评价,选择一种快速、准确、低廉、适合临床常规检验的方法。第56页，课件共82页，创作于2023年2月试剂磺基水杨酸-硫酸钠溶液叠氮钠生理盐水蛋白质标准液第57页，课件共82页，创作于2023年2月实验操作取3支试管，按下表操作加入物（ml）测定管标准管空白管脑脊液0.5----蛋白质标准溶液—0.5—生理盐水----0.5磺基水杨酸-硫酸钠溶液4.04.04.0第58页，课件共82页，创作于2023年2月双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（-CONH2-）均可呈双缩脲反映。第23页，课件共82页，创作于2023年2月【试剂】（1）6mol/L氢氧化钠：溶解240g优质纯氢氧化钠于新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中，稀释至1L，置聚乙烯瓶内盖紧保存。（2）双缩脲试剂：称取未风化没有丢失结晶水的硫酸铜（CuSO4·5H2O）3g，溶于500ml新鲜制备的蒸馏水或刚煮沸冷却的去离子水中，加酒石酸钾钠9g，碘化钾5g，待完全溶解后，加入6mol/L氢氧化钠100ml，并用蒸馏水稀释至1L。置聚乙烯瓶内盖紧保存。（3）双缩脲空白试剂：溶解酒石酸钾钠9g，碘化钾5g，于新鲜制备的蒸馏水中。加6mol/L氢氧化钠100ml，再加蒸馏水稀释至1L。（4）蛋白标准液：收集混合血清，用觊氏定氮法测定蛋白含量，亦可用定值参考血清或白蛋白标准血清。第24页，课件共82页，创作于2023年2月实验操作取3支试管，按下表操作加入物（ml）测定管标准管空白管待测血清0.1——蛋白质标准液—0.1—蒸馏水0.40.40.5双缩脲试剂3.03.03.0第25页，课件共82页，创作于2023年2月混匀，37℃水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算测定管吸光度血清总蛋白（g/L）=---------------------*蛋白质标准液浓度（g/L）标准管吸光度标准曲线1.配制20g/L蛋白标准液2.取试管6支，标记后，按下表操作第26页，课件共82页，创作于2023年2月血清蛋白质标准曲线绘制操作步骤加入物（ml）空白管1234520g/L蛋白质标准液-0.10.20.30.40.5蒸馏水0.50.40.30.20.1-双缩脲试剂3.03.03.03.03.03.0相当于血清蛋白质（g/L）020406080100第27页，课件共82页，创作于2023年2月注意事项：1.血清标本以新鲜为宜，含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行比色2.蛋白标准液要澄清，如果浑浊应更换，否则需作标准空白管，以消除浊度的影响。3.试管，刻度吸管应清洁，否则会有浑浊出现。4.高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。5.铵离子能与氢氧化铜反应，因此，实验所用器材不可含铵盐。第28页，课件共82页，创作于2023年2月【临床意义】（一）血清总蛋白增高1.血液浓缩严重腹泻、呕吐、高烧2.合成增加主要见于球蛋白合成增加，多发性骨髓瘤。（二）血清总蛋白降低1.血液稀释静脉滴注过多低渗溶液，各种原因所引起的水钠潴留。2.摄入不足和消耗增加营养不良，慢性胃肠道疾病引起的消化吸收不良，消耗性疾病，结核病、甲亢、恶性肿瘤。3.合成障碍主要见于肝脏疾患。4.蛋白质丢失严重烧伤，大量血浆渗出，肾病综合症。第29页，课件共82页，创作于2023年2月第三节血清清蛋白测定第30页，课件共82页，创作于2023年2月血清清蛋白测定（溴甲酚绿法）【原理】溴甲酚绿（BCG）在pH4.2的环境中，在有非离子去垢剂（Brij-35）存在时，