细胞生物学实验内溶酶体.pdfVIP

实验原理

•Lyso-TrackerRed是一种溶酶体(lysosome)红色荧

光探针，可以用于活细胞溶酶体特异性荧光染

色。

Lyso-TrackerRed为采用MolecularProbes公司

的DND99进行了荧光标记的带有弱碱性的荧光

探针，可以选择性地滞留在偏酸性的溶酶体中，

从而实现对于溶酶体的特异性荧光标记。中性

红(NeutralRed)和吖啶橙(AcridineOrange)也都

可以对溶酶体进行荧光染色，但中性红和吖啶

橙的染色缺乏特异性。

实验原理

•Mito-TrackerGreen是一种线粒体(mitochondria)

绿色荧光探针，可以用于活细胞线粒体特异性

荧光染色。

Mito-TrackerGreen为采用MolecularProbes公

司的carbocyanine进行了荧光标记的一种Mito-

Tracker，分子量为671.88，可以用作线粒体特

异性的荧光探针。和rhodamine123或JC-1相比，

Mito-TrackerGreen对于线粒体的染色不依赖于

线粒体膜电位。

1.实验目的

•掌握荧光显微镜工作的原理

•了解细胞器在细胞内的分布

Lyso-TrackerRed工作液的配制：

•a.取少量Lyso-TrackerRed按照1:13333-

1:20000的比例加入到细胞培养液或适当的

溶液(例如含钙镁离子的HBSS)中，使

•最终浓度为50-75nM。例如取1μlLyso-

TrackerRed加入到20ml或13.33ml细胞培养

液或适当的溶液(例如含钙镁离子的

•HBSS)中。混匀后即为Lyso-TrackerRed工作

液。HBSSwithCa2+Mg2+(C0219)可以向

•2.溶酶体的荧光标记：

•a.去除细胞培养液，加入步骤1配制好的并37℃预温育的

Lyso-TrackerRed染色工作液，与细胞37℃共孵育30-120分

钟。

•b.去除Lyso-TrackerRed染色工作液，加入新鲜的细胞培养

液。

•c.随后通常用荧光显微镜或激光共聚焦显微镜进行观察。

此时可观察到溶酶体呈明亮的强荧光染色。如果染色效果

欠佳，可以提高Lyso-TrackerRed染色工作液中Lyso-Tracker

Red的浓度或在推荐的时间范围内适当延长染色时间。

使用说明：

•1.Mito-TrackerGreen液的配制：

•用无水DMSO(anhydrousdimethylsulfoxide)配

制Mito-TrackerGreen至终浓度为1mM。配制

后可以-20℃或更低温度避光保

•存。

•2.Mito-TrackerGreen工作液的配制：

•a.取少量1mMMito-TrackerGreen液按照1:5000-1:50000的比例加入到细胞

培养液或适当的溶液(例如含钙镁离子的

•HBSS)中，使最终浓度为20-200nM。例如取1μlMito-TrackerGreen加入到50ml

或5ml细胞培养液或适当的溶液(例如

•含钙镁离子的HBSS)中。混匀后即为Mito-TrackerGreen工作液。HBSSwithCa2+

Mg2+(C0219)可以向碧云天订购。

•b.Mito-TrackerGreen工作液使用前需37℃预温育。

•注：工作液中Mito-TrackerGreen的浓度可以根据实际情况进行适当调整。为

降低背景，在染色效果可以接受的范围内，建议尽量使用较低浓度的Mito-

TrackerGreen。

•3.线粒体的荧光标记：

•a.去除细胞培养液，加入步骤2配制好的并37℃预温育的Mito-TrackerGreen染

色工作液，与细胞37℃共孵育15-45