SF_T0134-2023法医学生物检材核酸提取技术规范.pdf

SF/T0134—2023

法医学生物检材核酸提取技术规范

1范围

本文件规定了法医学常见生物检材的核酸提取方法和质量评估方法。

本文件适用于实验室对生物检材进行核酸的提取、纯化以及质量评估。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T27025检测和校准实验室能力的通用要求

JJG646移液器检定规程

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

核酸nucleicacid

由核苷酸或脱氧核苷酸通过3,5-磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。

注：包括脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两类，是储存遗传信息和传递遗传信息的主要物质。

核酸完整度integrityofnucleicacid

核酸（3.1）提取过程中一级结构（序列）保持完整而不发生改变的程度。

核酸纯度purityofnucleicacid

核酸（3.1）提取物中目标核酸与残留杂质的相对含量。

注：残留杂质包括来自于检材的蛋白质、多酚、多糖等，来自于提取溶剂的有机物、异硫氰酸盐等，以及DNA提取时

残留的RNA、RNA提取时残留的DNA。

提取产量extractionyield

单位样品中提取到的核酸的总质量。

注：用于评估提取效率。

4缩略语

下列缩略语适用于本文件。

CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（CetyltrimethylammoniumBromide）

DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）

DTT：二硫苏糖醇（Dithiothreitol）

EDTA：乙二胺四乙酸（EthylenediaminetetraaceticAcid）

OD：光密度（OpticalDensity）

PBS：磷酸缓冲盐溶液（PhosphateBufferedSaline）

PCR：聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction）

PVP：聚乙烯基吡咯烷酮（Polyvinylpyrrolidone）

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PVPP：交联聚乙烯基吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrolidonecross-linked）

RIN：RNA完整值（RNAIntegrityNumber）

RNA：核糖核酸（RibonucleicAcid）

RNase：核糖核酸酶（Ribonuclease）

SDS：十二烷基磺酸钠（SodiumDodecylSulfonate）

TE：含乙二胺四乙酸的三羟甲基氨基甲烷缓冲液（Tris-EDTABufferSolution）

Tris：三（羟甲基）氨基甲烷（TrisHydroxymethylaminomethane）

5总体要求

本文件中法医学生物检材包括人源性生物检材及非人源性生物检材，有条件的情况下，宜选择新

鲜的检材。

本文件中核酸提取包括DNA提取和RNA提取。

核酸提取过程中宜避免物理因素（如剪切力、高温等）、化学因素（如强酸、强碱等）和生物因

素（如核酸酶等）的破坏，保证一级结构的完整性。提取过程中宜避免外界环境（如灰尘、气溶胶等）

对核酸提取的污染；排除其他分子（如蛋白质、多糖、脂类和有机溶剂等）的污染；以及防止试验过程

中废弃物和废弃液等对环境的污染。在整个试验过程中应采取安全有效的防护措施。

核酸提取宜使用商品化试剂，具体操作流程宜参照商品化试剂的使用说明书。无商品化试剂或相

应的使用说明书时，应按照第8章和第9章的规定执行。具体操作应根据样本量、样本状态等调整实验

试剂的用量、离心参数等，并制定相应方法的作业指导书。

核酸提取可采用全自动核酸提取工