SN∕T 5175-2021 国境口岸蚊类DNA条形码鉴定规程.pdf

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中华人民共和国出入境检验检疫行业标准

SNIT5175-2卫1

国境口岸蚊类DNA条形码鉴定规程

IdentificationcodesformosquitoswithDNAbarcodingatfrontierports

2021-06-18发布2022-01-01实施

中华人民共和国海关总署发布

SNff5175-2021

前言

本文件按照GB厅1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规

定起草。

请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。

本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。

本文件起草单位：中华人民共和国福州海关。

本文件起草人：高博、方义亮、张建庆、玉宇平、黄J恩炯。

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SNff5175-2021

国境口岸蚊类DNA条形码鉴定规程

1范围

本文件规定了国境口岸蚊类DNA条形码鉴定方法中DNA提取、基因的扩增及序列的比对分析、

结果判定等。

本文件适用于国境口岸蚊类中成虫、幼虫、踊、残肢不全等标本的DNA条形码鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适

用于本文件。

GB19489实验室生物安全通用要求

SN厅1876医学媒介生物标本采集、制作及保存规程。

SN厅2752.4卫生检疫人员的自我防护规范第4部分：实验室人员

SN厅4278国境口岸医学媒介昆虫DNA条形码鉴定操作规程

WSff230临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1ITS2基因ITS2gene

ITS2基因核糖体内转录间隔区2，变异速度适中，能够提供较丰富的变异位点和信息位点，位于

5.8s与285之间，可应用于种团、复合体之间进行鉴定。

4方法原理

基于线粒体CO／基因序列对蚊类进行鉴定，确定种内差异、种间差异，结合核糖体ITS2基因对

种团、复合组进行鉴定。

5仪器设备、试剂与实验准备

5.1仪器设备

生物安全柜、高压灭菌锅、离心机、微量分光光度仪、PCR仪、电泳设备、凝胶成像系统等。

5.2主要试剂

动物组织基因组DNA提取试剂盒、PCRPremix

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SN.厅5175-2021

5.3实验准备

实验室生物安全符合GB19489和SN厅2752.4的规定：PCR防污染措施遵照wsrr230的要求

执行。

6鉴定方法

6.1取样

标本样品经过冷冻或乙隧麻醉，死后取成批同种样品的单份标本、珍稀单份标本取对称一侧组

织（如单侧蚊足）置于灭菌的洁净1.5mL离心管留用，如长期不用需放置体积分数为90%以上乙

醇－20℃保存。标本的其它同种个体或者部分针插作为凭证标本。

6.2凭证标本制作

将取样后的标本制作成凭证标本，标本的制作按照S阳r1876的要