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取小鼠脑组织

丁香园上面总结的方法，排版有点乱。

其实过程与大鼠近似，我的经验是：

1.?材料准备；大剪刀、眼科剪、眼科镊、大镊子、滤纸、竹签等；

2.?步骤：处死小鼠，取头颅；

剪开皮肤，漏出颅骨；

用大尖镊子夹住两侧眼眶，用眼科剪稍剪除颅骨中线；

再用眼科镊夹住颅骨从内向外夹，从下向上逐步去除颅骨；

当全脑露出时，再用眼科镊去除脑膜和血管；

然后用竹签从嗅球处向下取出全脑，即可。

3.?注意事项：用力轻柔，否则容易弄破脑部；

用剪刀剪颅骨时，一定要贴壁向上剪，否则容易剪破脑部；

去除脑膜时，不能硬拉，否则容易弄破大脑；

取出全脑时应把头顶朝下，用竹签轻轻取出，离桌面也不要太远、高；

若留病理，建议一定要取完整无损的大脑。

做免疫组化的话，稍微麻烦一点儿，因为脑组织含水量多，要固定的好，就需要先灌注。

先麻醉小鼠

剪开胸腔，找到心脏，从心尖入针，剪开右心耳

先用生理盐水灌注直到从心耳流出来的水清亮了

再改用固定液（一般是4%多聚甲醛）灌注至小鼠四肢僵硬

小鼠只需要用注射器就行了，我做的25～35g的小鼠一般用50mLNS+30mL多聚甲醛。具体步骤：常规麻醉小鼠，将其固定，用剪刀剪开胸部皮肤，暴露出皮下组织，剪开时注意钝性分离，以免误伤。然后用镊子提起剑突，用剪刀剪开胸腔，剪断两侧肋骨，暴露整个胸腔，小心误伤肺及心脏、大血管。用镊子撕开心包膜，暴露心脏，用眼科剪剪开右心耳，然后提起心尖将准备好的生理盐水注射器插入左心室，注射，注射时小心针头滑脱。生理盐水灌流至肺和肝的颜色都变成灰白色即可。然后用多聚甲醛灌流，针孔最好是同一个，多聚灌流时小鼠四肢会抽搐，待抽搐结束，小鼠僵硬即可。取下小鼠，用剪刀在颈部离断头颅，用剪刀在小鼠头颅中间皮肤剪一刀，将两边皮肤向下翻用手捏住，暴露整个颅骨，用眼科剪从脊髓端插入椎孔，沿着颅正中线剪开颅骨，注意剪刀向上翘一些，以免误伤脑组织，剪开后用弯眼科镊分离颅骨，小心分离，直至暴露整个大脑，然后用弯镊伸入颅底离断颅底神经，就可以取出整个脑子了。放多聚里固定24h后包埋切片即可。

具体操作如下：

实验操作步骤：

1)??小鼠称重，以每克小鼠0.0025ml4%戊巴比妥钠剂量的实施腹腔麻醉。也可以用10%的水合氯醛，3-5ul/g腹腔注射麻醉。

2)??将麻醉的小鼠仰放在操作台上，去毛。

3)??解剖小鼠，暴露心脏。

4)??找到心尖部，左手用镊子提起心尖部，右手或左手将灌流针刺破心尖部进针约0.5cm（最好是用小点的针头，用止血钳固定针尖，剪开右心耳。

5)??将灌流器的导管部开口放到生理盐水中里，打开灌流器灌流，直到从右心耳流出的液体为无色，同时小鼠肝脏色淡，肠管肿胀为止，停止灌流。没有灌流器的用注射器或者吊瓶都可以。

6)??将灌流器的导管小心的移至4%多聚甲醛或2.5%戊二醛中，注意不要产生气泡，开始灌流。此时如果看到小鼠四肢突然紧张，尾部卷曲，说明达到固定效果。

7)??灌流大约5分钟，灌流液用量约150毫升左右结束。（小鼠的用量没这么多）

8）??取材。取实验所需的标本。

9）??将取出的材料放到事先准备的多聚甲醛（戊二醛）中固定2——4小时后移至30%蔗糖中4度冰箱保存过夜。

我们实验室鼠脑冰冻切片采用4%的多聚甲醛固定，小鼠直接灌注saline20ml，4%多聚甲醛20ml经左心室固定然后取材在4度4%多聚甲醛后固定4-6h，浸20%-30%糖沉底，就可以切片，切片首先需要冰冻切片机，我们的leica1900的，不知道lz那里有没有这个机子，还有一种原始的自己刷冻台的那种，比较麻烦，切片厚度大概选择20-40um差不多

开胸时要把肋骨提起，大U字剪开左右肋弓后掀起，血管钳固定一下（以免挡遮视野）；平头针插入后稍许打开输液器开关并迅速剪开充盈的右心耳（可见血涌出），用血管钳将心室和平头针一起钳夹固定再推（但滴速也不能太快以免血管被冲破，使灌流液流进肺里）。另：开胸时动作尽量要快；针头可以不插入主动脉，留置于左室也行。

试剂名称：4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠

所需药品及剂量：A液：多聚甲醛40g

蒸馏水400ml

B液：Na2HPO4·2H2O6.88g

蒸馏水300ml

C液：NaOH3.86g

蒸馏水200m

操作过程：A液最好在500ml的三角烧瓶中配制，至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1nNaOH或1NHCl将pH调至7.2～7.4，最后，补充蒸馏水至1000ml充分混合

应用范围：光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，最好加入少量新鲜配制的戊二醛

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