WS∕T 633-2018 巴贝虫检测虫种核酸鉴定法.pdf

!CS11.020

c61

中华人民共和国卫生行业标准

WS/T633-2018

巴贝虫检测虫种核酸鉴定法：

DetectionofBabesiaspp.一一一Identificationofspeciesbynucleicacidmethod

2018-09-26发布2019-04-01实施

中华人民共和国国家卫生健康委员会发布

WS/T633-2018

目lj~

本标准按照GB/Tl.1一2009给出的规则起草。

本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。

本标准起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、复旦大学、第二军医大学。

本标准起草人：刘琴、周晓农、张仪、胡薇、陈家旭、朱准民。

I

WS/T633-2018

巴贝虫检测虫种核酸鉴定法

1范围

本标准规定了检测巴贝虫的虫种核酸鉴定法。

本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对巴贝虫的检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

ws厅564巴贝虫病珍断

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

巴贝虫Babesiaspp.

一类寄生于人和脊椎动物红细胞内的原虫，可引起巴贝虫病（babesiosis）。感染人体的巴贝虫种

类主要有四鼠巴贝虫（Bαbesiamicroti）、分歧巴贝虫（B.divergens）、邓肯巴贝虫（B.duncani）和猎户

巴贝虫（B.venatorum）等（参见附录A）。

4仪器和器材

4.1高速离心机

最大相对离心力为12OOOxg。

4.2涡旋仪

无级调速范围为200r/Jnin~3000r/Jnin。

4.3PCR扩增仪

温度范围为4℃～99℃，温度精确为0.1℃，热盖为105℃。

4.4微波炉

4.5电泳仪

电压为5v~5000v，电流为lmA~500m.A。

WS/T633-2018

4.6凝胶成像系统

镜头分辨率（H×V）为I360×1024，光源为透射UV。

5试剂和材料

5.1分子生物学试剂

Taq酶、脱氧核糖核昔三磷酸（dNTPs）、分子质量指示物及核酸提取试剂盒选用商品化产品。

5.2化学试剂

Tris－乙酸电泳缓冲液（TAE）、~、脂糖凝胶、6×加样缓冲液（参见附录B）。

5.3引物

扩增巴贝虫18S核糖体RNA(18SrRNA）基因和转录间隔区（ITS）基因的特异性引物（见附录

C）。

5.4参照材料

阳性对照为田鼠巴贝虫peabody叫jr株基因组DNA。

空白对照为去离子灭菌水。

阴性对照为健康人全血基因组DNA。

6检测步骤

6.1样品

样品为临床珍断或疑似巴贝虫病病