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饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的测定
1范围
本文件描述了饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的液相色谱-原子荧光光谱联用(LC-HG-AFS)和液
相色谱-电感耦合等离子体质谱(LC-ICP/MS)联用的测定方法。
本文件适用于饲料添加剂酵母硒中硒代蛋氨酸的测定。
本文件液相色谱-原子荧光光谱联用法硒代蛋氨酸的检出限为10mg/kg,定量限为30mg/kg;液相
色谱-电感耦合等离子体质谱联用法硒代蛋氨酸的检出限为1mg/kg,定量限为3mg/kg。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,
仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其必威体育精装版版本(包括所有的修改单)适用于本
文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
GB/T8170数值修约规则与极限数值的表示和判定
GB/T20195动物饲料试样的制备
3术语和定义
本文件没有需要界定的术语和定义。
4液相色谱-原子荧光光谱联用法(LC-HG-AFS)
原理
试样以蛋白酶酶解,采用液相色谱-原子荧光光谱联用仪检测,外标法定量。
试剂或材料
除另有规定外,所用试剂均为分析纯。
4.2.1水:GB/T6682,一级。
4.2.2甲醇(CHO):色谱纯。
4
4.2.3乙酸(CHO)。
242
4.2.4盐酸(HCl):优级纯。
4.2.5四甲基氢氧化铵(CHNO):25%(V/V)。
4236
4.2.6三羟甲基氨基甲烷[NHC(CHOH)]。
223
4.2.7乙酸铵(CHCOONH):色谱纯。
34
4.2.8蛋白酶(proteaseXIV型,CAS:9036-06-0):酶活力≥3.5U/mg(在pH7.5和37℃条件下,
每分钟水解酪蛋白产生不少于3.5μmol酪氨酸)。
4.2.9硒代蛋氨酸(CHNOSe,CAS:3211-76-5):纯度≥98%。
5112
4.2.10盐酸溶液(6mol/L):量取100mL盐酸(4.2.4)缓慢加入100mL水中,混匀,冷却后使用。
4.2.11三羟甲基氨基甲烷-盐酸(Tris-HCl)缓冲溶液(0.1mol/L,pH7.5):准确称取12.11g三羟
甲基氨基甲烷(4.2.6),用900mL水溶解,用盐酸溶液(4.2.10)调节pH值至7.5,定容至1L。
4.2.12流动相:称取1.156g乙酸铵(4.2.7)溶于900mL水中,加入0.15mL四甲基氢氧化铵(4.2.5),
用乙酸(4.2.3)调节pH至5.5,加入50mL甲醇(4.2.2),加水定容至1L。
4.2.13硒代蛋氨酸标准储备液(300μg/mL):称取15.00mg硒代蛋氨酸标准品(4.2.9),精确至0.01
mg,于50mL容量瓶中,用水溶解并定容。此溶液置于0~4℃冰箱保存,有效期为1个月。
1
4.2.14硒代蛋氨酸中间溶液(3μg/mL):吸取1.0mL硒代蛋氨酸标准贮备液(4.2.13)于100mL
容量瓶内,用水定容,此溶液临用现配。
4.2.15硒代蛋氨酸标准工作溶液:吸取硒代蛋氨酸中间溶液(4.2.14)0mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、
6.0mL、8.0mL、10.0mL于50mL容量瓶内,用水定容,得到浓度分别为0μg/L、60μg/L、120μg/L、
240μg/L、360μg/L、480μg/L、600μg/L的标准工作溶液。
仪器设备
4.3.1液相色谱-原子荧光光谱联用仪:配备硒空心阴极灯。
4.3.2电子天平:感量0.1mg和0.01mg。
4.3.3水浴摇床:振荡速率150r/min,37℃±1℃。
4.3.4离心机:转速不低于10000r/min。
4.3.5滤膜:水系,孔径为0.45μm。
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