8病毒感染的分子生物学检验.pptVIP

*股(+)RNA二倍体，每条链长约9.8kb，两条链的5’端借氢键形成二聚体基因结构：5LTR-gag-pol-env-3LTR。5端具cap结构，3端有polyA基因含9个基因，各基因完全或部分重叠3个结构基因(gag、pol、env)--编码病毒颗粒的结构蛋白6个调控基因（tat、rev、nef、vif、vpr、vpu）HIV基因组结构*结构基因gag、pol、env调控基因tat、rev、nef、vif、vpr、vpu*Gagp55前蛋白p24(衣壳蛋白)p17（内膜蛋白）p7（核衣壳蛋白）Pol编码：逆转录酶、蛋白水解酶、整合酶与病毒复制密切相关Env编码包膜前体蛋白，产生gp120(外膜蛋白)和gp41(穿膜蛋白)介导病毒包膜和宿主包膜融合有宿主细胞表面CD4分子结合位点*1、长未端重复序列：HIV基因组两端的长未端重复序列（longterminalrepeat,LTR）不编码病毒产物，对于病毒基因表达的起始和调节至关重要。HIVLTR含顺式调控序列，它们控制前病毒基因的表达。已证明在LTR有启动子和增强子并含负调控区。2、gag基因：即组织特异性抗原基因，编码分子量为55KD的前体蛋白(P55)，由未拼接的病毒mRNA表达。P55经病毒蛋白酶切割，形成P17、P24、P15三种蛋白。P17称为基质蛋白(MA)，附着于病毒脂质又层膜的内侧，形成毒粒的内膜，起稳定毒粒的作用。P24称及壳蛋白，形成病毒的锥形核。P15进一步被裂解为P9和P7两种核壳蛋白，与病毒的RNA结合，使RNA不受外界核酸酶破坏。3、pol基因：Pol基因编码聚合酶前体蛋白（P34），经切割形成蛋白酶、整合酶、逆转录酶、核糖核酸酶H，均为病毒增殖所必需。HIV基因及其编码产物*4、env基因：约2589bp，编码约826个氨基酸的前体蛋白并糖基化成gp160，经剪切成gp120和gp41。gp120含有中和抗原决定簇，已证明HIV中和抗原表位，在gp120V3环上，V3环区是囊膜蛋白的重要功能区，在病毒与细胞融合中起重要作用。gp120与跨膜蛋白gp41以非共价键相连。gp41与靶细胞融合，促使病毒进入细胞内。实验表明gp41亦有较强抗原性，能诱导产生抗体反应。5、tat基因：编码蛋白（P14）可与LTR结合，以增加病毒所有基因转录率，也能在转录后促进病毒mRNA的翻译。6、rev基因：基因产物是一种顺式激活因子，能对env和gag中顺式作用抑制序列(Cis-Actingrepressionsequance,Crs)去抑制作用，增强gag和env基因的表达，以合成相应的病毒结构蛋白。*7、nef基因：编码蛋白P27对HIV基因的表达有负调控作用，以推迟病毒复制。该蛋白作用于HIvcDNA的LTR，抑制整合的病毒转录。可能是HIV在体内维持持续感集体所必需。8、vif基因：对HIV并非必不可少，但可能影响游离HIV感染性、病毒体的产生和体内传播。9、vpu基因：为HIV-1所特有，对HIV的有效复制及病毒体的装配与成熟不可少。10、vpr基因：编码蛋白是一种弱的转录激活物，在体内繁殖周期中起一定作用。HIV-2基因结构：不含VPU基因，但有一功能不明VPX基因。核酸杂交法检查HIV-1与HIV-2的核苷酸序列，仅40%相同。env基因表达产物激发机体产生的抗体无交叉反应*HIV复制过程HIV病毒在宿主细胞复制开始，首先二条RNA在病毒逆转录酶的作用下逆转为(-)DNA，再以DNA为模板，在DNA多聚酶的作用下复制DNA，这些DNA部分存留在细胞浆内进行低水平复制，部分与宿主细胞核染色质DNA整合在一起，成为前病毒，使感染进入潜伏期。经过2-10年的潜伏性感染阶段，当受染细胞被激活，前病毒DNA在转录酶作用下转录成RNA，RNA再翻译成蛋白质，经过装配后形成大量的新病毒颗粒，这些病毒颗粒释放出来后，继续攻击其它CD4＋T淋巴细胞。大量的CD4+T淋巴细胞被HIV攻击后，细胞功能被损害和大量破坏是AIDS患者免疫功能缺陷的原因。*病毒复制*HIV分子生物学检验1、病毒核酸检测定性检测原