《HPLC色谱柱介绍》教学课件.pptVIP

测柱效-良好的色谱实验习惯拿到一根新色谱柱时，先测柱效保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录色谱测试条件定期检测柱效定期检测仪器的谱带展宽测柱效的方法色谱柱种类繁多,性能各异,测定方法亦各不相同Waters的色谱柱均附有UseandCare说明书,可按说明书所述方法测定如若柱盒中无纸质说明书，请到以下网址获取/waters/form.htm?idvocale=zh_CN以下是Waters反相C18柱的测定方法:流动相:乙腈/水=60:40;流速:1ml/min样品:50mgAcenaphthene(二氢苊)溶于100ml乙腈,加入600μl丙酮进样量1–3μl检测波长:254nm计算色谱柱的柱效N理论塔板数计算公式：W s 方法Wtan 16 切线法Wh 5.54 半峰高W3s 9 3sW4s 16 4sW5s 25 5sInjectInject用“切线”法计算柱效不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来好柱坏柱好柱InjectInject用“5?”法计算柱效坏柱测量色谱系统的谱带展宽卸下色谱柱，用UNION(两通)代替之按测柱效方法，以1/10的样品浓度进样，大约2~5微升用5sigma方法测4.4%峰高处的峰宽：W仪器参数∶流速∶1.0ml/min检测器时间常数∶小于0.2谱带展宽（ml）=1000×W（min） 色谱柱的正确使用及操作流动相的转换特别是GPC柱流速(压力)的变化幅度温度的变化幅度专用色谱柱∶样品及溶剂的要求正确使用色谱柱(一)样品方面除去微粒及杂质了解样品在流动相中的溶解度如溶样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出了解样品与色谱柱的基质/填料是否有相互作用正确使用色谱柱（二）流动相方面除去微粒纯度的要求超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低缓冲液的pH值，在填料的允许范围内缓冲液（盐）的浓度有机溶剂：色谱纯,杂质含量尽量低,并与填料相匹配流动相对样品的溶解度有机溶剂或水的比例色谱柱的在线保护装置给色谱柱提供物理的保护除去样品及流动相中的颗粒给色谱柱提供化学的保护防止分析柱被化学污染装置在线过滤器SentryGuard保护柱为何杂化颗粒柱可增加在高pH下的柱寿命？硅胶快速溶解严重的柱失效柱寿命短暂SurfacemodifiedSilicaParticles因嵌入硅甲基的阻挡,颗粒表面溶解速度明显减缓柱寿命大大延长XTerra?HybridParticles普通硅胶柱基于杂化颗粒的Xterra柱XBridge:第二代杂化填料的合成硅胶基体中插入的桥式乙基Anal.Chem.2003,75,6781-6788美国专利号6,686,035B2四甲基硅烷(TEOS)双(三乙氧基硅基)乙烷(BTEE)+4聚乙氧基硅烷(BPEOS)挑战性流动相:0.02NNaOHpH12.3,50°C测试时的流动相:50/50(v/v)乙腈/水,50°C标准测试物:苯癸酮01020304050XBridge?C8XBridge?C18XBridge?PhenylXBridge?ShieldRP18XTerra?MSC18Symmetry?C18要使柱效降低一半,需将色谱柱曝露在0.02NNaOH(pH12.3)和50℃下的小时数将高pH柱稳定性推向新极限磷酸拥有三个pKa:pK1=2.15,pK2=7.2,pK3=12.3磷酸缓冲盐系统具有超低的紫外吸收,对从事非LC/MS分析的科学家具有很大吸引力持续有科学家寻求在以上三个pH范围均可稳定使用的分离柱“如果你能提供具有以上能力的色谱柱,我肯定会购买它!”从许多色谱学者得到的反馈X-Bridge系列柱是目前唯一提供这一可能的色谱柱!将高pH柱稳定性推向新极限能否使用高pH磷酸缓冲系统(pH12)??对色谱柱填料的了解(七)填料的热稳定性普通硅胶填料柱温:≤60℃聚合物填料(高温GPC)柱温:≤150℃杂化硅胶填料(XTerra,XBridge)柱温:≤90℃液相色谱柱的分类从柱子类型上分：分配/吸附，离子交换，凝胶，亲合从柱体积及柱结构上分：内径：2.1mm以下(微径柱)、2.1mm～7.8mm(分析柱)、7.9mm～50mm（制备柱）