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我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，证实我的猜测没有错：表里边有一个活的生物

蛋白质的分离纯化与鉴定

Isolation,PurificationandIdentificationof Protein

分子生物学圣经—分子克隆实验指南

为什么要纯化蛋白质？

蛋白质是生命功能的执行者

理论意义：深入研究某种蛋白质的功能以及作用机制，如信号通路中的蛋白质

…

应用价值蛋白质工程医药、工业、科研… 作为药物靶点…

蛋白质工程中进行蛋白质纯化的必要性

首先，需要单一的蛋白质作为实验材料，研究其结构与功能；

其次，对蛋白质进行修饰改造时需要单一的蛋白质作为原材料；

最后，为了生产性能更优良的蛋白质，需要对设计改造过的蛋白质进行大量纯化，从而开发出相关产品。

本章概要

蛋白质纯化方法

蛋白质纯化原则

纯化步骤

蛋白质的鉴定

一、蛋白纯化方法

蛋白质纯化的根据：

不同的蛋白质，理化性质不同。

理化性质不同的原因：

氨基酸的数目和序列不同。

1.与蛋白质分离纯化相关的理化特性

①分子大小

②分子形状

③带电特性

④溶解特性

⑤与配体特异性结合不同

⑥吸附性质

⑦变性和复性

1.1分子大小

蛋白质分子大小主要取决于：蛋白质肽链的数目

每条肽链的氨基酸残基数目。

几百~百万Da

常用方法

▫透析

▫超滤

▫凝胶过滤

▫离心

Ø透析(dialysis)利用透析袋把大分子蛋白质与小

分子化合物分开的方法。

Ø超滤法

应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓缩蛋白质溶液的目的

Ø超滤法

应用正压或离心力使蛋白质溶液透过有一定截留分子量的超滤膜，达到浓

缩蛋白质溶液的目的

凝胶过滤

是按照天然蛋白质相对分子质量大小进行分离的技术，又称为分子筛层析或排阻层析。

超速离心

Ø离心（centrifugation）：利用机械的快速旋转所产生的离心力，将不同密度的物质分离开来的方法。

Ø超速离心法(ultracentrifugation)：~60万g，

6万~8万r/min。可用来测定蛋白质分子量。

超速离心

我吓了一跳，蝎子是多么丑恶和恐怖的东西，为什么把它放在这样一个美丽的世界里呢？但是我也感到愉快，

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