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化妆品舒缓功效—斑马鱼刺痛舒缓测试方法

1范围

本标准规定了斑马鱼刺痛舒缓测试方法的基本要求。

本标准提供一种化妆品舒缓功效的斑马鱼生物评估方法，适用于测试通过舒缓刺痛而达到舒缓

效果的原料及配方的功效评价。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于

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GB/T6682分析实验室用水规格和测试方法

DB32/T3979-2021实验用斑马鱼饲育技术条件

OECDTG236-2013化学品测试规范斑马鱼胚胎急性毒性测试

ISO15088-2017污水对斑马鱼胚胎的急性毒性测试

3术语和定义

下列术语及定义适合于本文件。

3.1斑马鱼胚胎Zebrafishembryo

处在依靠卵黄提供能量发育阶段的斑马鱼胚胎。

3.2没有心跳Lackofheartbeat

一分钟内心脏没有跳动的斑马鱼。

3.310%致死浓度10%Lethalconcentration,LC10

受试物导致10%受试斑马鱼死亡的浓度。斑马鱼没有心跳则判定为死亡。

4原理

化妆品会通过激活辣椒素通路（TRPV1）引起皮肤刺痛。人体皮肤上的辣椒素通路可以通过辣椒素、

酸性（pH6.05）及温度高于42℃时被激活。斑马鱼也有辣椒素通路，且也能在高温度时被激活，在

37℃或以上时达到高峰，表现为游动速度显著增快。因此，应用高温激活的斑马鱼非常适合用于测试

舒缓刺痛测试。应用软件测量斑马鱼运动距离，比较受试物处理组和模型对照组斑马鱼运动距离变化，

计算运动距离减短率以评价原料或产品的刺痛舒缓效果。

5仪器和设备

5.1斑马鱼养殖设备

设备需配有温控装置，水循环和过滤装置，养殖容器用玻璃或常见食品级PC材质制成。可采用通

用斑马鱼养殖设备或按实验室需求配备鱼缸（如长宽高45cm×45cm×30cm）。

5.2产卵盒/缸

由玻璃、不锈钢或其它惰性材料制成，配备网筛（网格大小为2mm×2mm，由不锈钢或多项材料组

成用来保护鱼卵）。

5.3水质监测设备

pH计、溶解氧测定仪、盐度计（电导率测定仪）。

5.4分析天平

精度0.1mg。

5.5显微镜

配带照相系统，最大放大倍数应大于80倍的体式显微镜。方法A中显微镜需配带绿色荧光。

5.6测试容器

测试容器：玻璃或聚苯乙烯测试容器（如96-孔板，培养皿）。如测试物可能吸附于聚苯乙烯容器

时（如非极性化学品），应选用惰性材料（如玻璃）来减少吸附。

5.7恒温箱

精度±1℃。

5.8丰年虾孵化器

设备需配有孵化桶，气管，气量调节阀，气泵截止开关和止逆阀装置。

5.9斑马鱼运动记录仪

可红外线记录斑马鱼行动轨迹并能对轨迹进行测量分析。如DanioVision（NoldusInformation

Technology)。

5.10其他常规测试仪器和设备

移液管、离心管、玻璃容器（如烧杯、容量瓶等）、旋涡混合仪、超声水浴锅、离心机、低温冰

箱、可调节移液器和吸头。

6主要试剂与耗材

6.1水

符合GB/T6682规定。

6.2甲醇、二甲基亚砜、乙醇等助溶剂

分析纯级别。

6.3亲鱼养殖用水

称取4g海盐溶于10L水配制而成，盐度为0.25～0.50‰，电导率为500～800µS/cm，溶解氧80%

饱和度，pH值6.5～8.5，硬度30～300mg/L（以碳酸钙计）。

6.4丰年虾（Artemiasalina）卵

丰年虾休眠卵需干燥避光冷藏。称取约15g海盐溶于1L水配制丰年虾卵孵化水，密度以不超过4g/L

丰年虾卵为宜。

6.5鱼培养液

称取2940mg无水氯化钙，1233mg七水硫酸镁，630mg碳酸氢钠，55mg氯化钾溶于10L水配制而成。

pH值6.5～8.5。化学品均为分析纯级别。

6.64-叔丁基环己醇溶液

用鱼培养液配制0.05g/L4-叔丁基环己醇溶液。

7实验方法

7.1受试生物

应用来源可靠（如中国国家斑马鱼资源中心）的野生型AB品系斑马鱼（Daniorerio）产卵测试。

亲鱼应具有较好的繁殖能力–鱼龄以6～12月最佳。传代尽量使用侧交以保持遗传多样性，纯品系亲鱼