植物DNA的提取-CTAB法.docx

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CTAB提取叶片DNA

苯酚:氯仿:异戊醇=25:24:1

氯仿:异戊醇=24:1

向2mL离心管,加入2颗钢珠,液氮冷冻,研磨仪磨碎。(钢珠磨碎叶片,液氮可以帮助细胞快速破裂)

加入400ulCTAB提取缓冲液(500μL/100mg植物组织),65℃烘箱30min,期间每隔10min颠倒混匀一次。(CTAB溶液有溶解DNA的作用)

加入500μL苯酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),剧烈摇动或漩涡振荡器混匀,12000rpm离心10min,将上层水相转移至新的2mL离心管。(去除蛋白质)

加入500μL氯仿:异戊醇(24:1),剧烈摇动或漩涡振荡器混匀,12000rpm离心10min,将上清转移至新的1.5mL离心管。氯仿:加速有机相和水相分层,去除残留酚;异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的起泡。

加入0.7倍体积异丙醇,-20℃沉淀30min以上。(沉淀DNA)

12000rpm离心10min,弃上清,加1mL75%乙醇洗涤一次。(去除异丙醇)

在超净工作台内吹干5min,加50μLTE溶解DNA。

放入烘箱65℃溶解30min。

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