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桑蚕微粒子病诊断防控技术规程

1范围

本文件规定了四川省桑蚕微粒子病诊断和防控技术要求。

本文件适用于四川省桑蚕微粒子病的诊断和防控。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB/T20395桑蚕微粒子病病原鉴定方法

NY/T1027桑园用药技术规程

NY/T3677家蚕微孢子虫荧光定量PCR检测方法

DB51/T848养蚕消毒技术规程

DB51/T1187桑蚕原蚕基地建设规范

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

桑蚕微粒子病pebrineforsilkworm(Bombyxmori)

由桑蚕微孢子虫（NosemabombycisNaegeli）感染引起的蚕病。

3.2

补正检查correctiveinspectionforpebrine

从母蛾检疫合格的原蚕种中，逐卵圈抽取少量蚕卵高温催青，对孵化蚁蚕及卵壳、死卵，或原蚕种

正常收蚁后的催青死卵、尾蚁、卵壳等，进行微粒子病检查。

3.3

预知检查predictiveinspectionforpebrine

从饲养到制种全过程，对幼虫、蛹、成虫及其排泄物（如：蚕粪、熟蚕尿、蛾尿等）、脱出物（如：

蜕皮壳、蛹壳、鳞毛等）等抽样，进行微粒子病检查。

3.4

Ct值cyclethreshood

每个样品反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

1

3.5

引物primer

在核苷酸聚合作用起始时，刺激合成的，一种具有特定核苷酸序列的大分子，与反应物以氢键形式

连接。

3.6

探针probe

一段带有检测标记，且顺序已知的，与目的基因互补的核酸序列(DNA或RNA)。

4诊断技术

4.1常规诊断

4.1.1试剂与材料

4.1.1.1氢氧化钾溶液[w(KOH)2％]、浓盐酸[w(HCl)30％]、过氧化氢溶液[w(HO)10％]、乙醇溶

22

液[w(CHCHOH)75％]、无菌水。分析用水按GB/T6682规定执行。

32

4.1.1.2解剖剪、镊子、橡皮吸管；研钵、研磨棒；样品袋、离心管（1.8mL、5mL）；容量瓶、量

筒、烧杯；载玻片、盖玻片；无纺布滤纸。

4.1.2主要仪器设备

普通光学显微镜、相衬（相差）显微镜，放大倍数16倍×40倍；生化培养箱（温度范围10℃～50℃、

湿度范围50%~95%）；冰箱（温度为0～4和-20）；电子天平（精度0.01g）；离心机（0r/min

℃℃℃

~3000r/min）。

4.1.3外观观察

通过肉眼观察，蚕的不同发育阶段是否具有下列症状：

a)小蚕期：收蚁后不疏毛、体色深暗、体躯瘦小、发育缓慢、重症死亡；群体发育不齐。

b)大蚕期：表皮缩皱、体呈锈色；体壁出现微细不规则黑褐色病斑，以尾角末端、气门周围和胸

腹足外侧部位较多；蜕皮困难、死亡；群体发育不齐。

c)蛹蛾期：蛹表皮无光泽、反应迟钝、腹部松弛，体壁出现微细不规则黑褐色病斑，感病严重的

不化蛾、死亡；蛾羽化展翅不良、鳞毛脱落、腹部膨大、节间松弛，交配能力差，产卵少。

d)卵期：卵形不正，排列不齐、多重叠卵，卵产附差、易脱落，不受精卵和死卵多；催青期发育

不整齐。

4.1.4解剖观察

将外观观察的具有上述大蚕期典型症状的病蚕，用解剖剪从背中线剪开，肉眼观察丝腺是否有乳白

色脓疱状斑块。

4.1.5显微镜检查

4.1.5.1样品采集

采集4.1.3描述的典型症状的小蚕、大蚕、蛹、蛾、卵，样品置于样品袋或离心管中，做好记载。