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发酵过程及优化实验

——产淀粉酶细菌的优化实验

淀粉酶是一类能催化淀粉糖苷键水解的酶类，作用于淀粉分子产生糊精、低

聚糖及葡萄糖等多种产物。而淀粉酶是应用最广的酶制剂之一，占全球酶工业市

场份额的25%-33%。淀粉酶广泛分布于动物、植物和微生物有机体中。

目前，已报道的能够产生淀粉酶的微生物种属包括不动杆菌属、微球菌属、

黄隐球酵母、盐单胞菌属、青霉菌属、类芽孢杆菌属、链霉素属、假单胞菌属和

杆菌菌属等。

实验一培养基的配置、灭菌

一、实验目的

1.温故配制微生物培养基的原理及配制的一般方法、操作步骤。

2.了解鉴别性培养基的原理，并掌握配制鉴别性培养基的放到和步骤。

二、实验原理

鉴别性培养基是一类在成分中加有能与目的菌的无色代谢产物发生显色反

应的指示剂，从而达到只需用肉眼辨别颜色就能方便地从近似菌落中找出目的菌

菌落的培养基。如对于淀粉酶产生菌的筛选，选用的是在含有淀粉的培养基中培

养微生物，滴加碘液进行染色，若出现透明圈，则表明该菌能产生胞外淀粉酶。

三、材料和器材

（1）培养基：

普通培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，自来水1000mL，pH7.2~7.4。

鉴别型培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，可溶性淀粉10g，NaCl5g，琼脂20g，

自来水1000mL，pH7.2~7.4。另一个鉴别性培养基加可溶性淀粉15g每1000ml。

（2）器皿：电子天平，烧杯，锥形瓶，量筒，培养皿，玻棒，涂布棒，移液管

等。

（3）其他：药匙，记号笔，报纸等。

（4）碘原液：称取碘化钾22g，加少量蒸馏水溶解，加入碘11g，溶解后定容至

500mL，贮于棕色瓶中。

稀碘液：取碘原液2mL，加碘化钾20g，用蒸馏水定容至500mL，贮于棕色

瓶中。

四、方法和步骤

1．配制基本培养基，分装50mL至250mL锥形瓶，供实验菌株扩增。

2．配制鉴别培养基，检测实验菌株是否能产胞外淀粉酶。

3．配制稀释用的生理盐水，分装4.5mL至每个试管（11管）。

4．包扎培养皿、锥形瓶，移液管等。

5．121℃，灭菌20min。

6．将实验菌株经过适当稀释涂布在鉴别性培养基上培养2天，在菌落周围滴加

碘液，根据透明圈的大小，挑取合适的单菌落进行后续实验。

-3-4

在加可溶性淀粉15g/L的鉴别性培养基中涂布的稀释梯度分别是10，10，

-5-5-6

10。在加可溶性淀粉10g/L的鉴别性培养基中涂布的稀释梯度分别是10，10，

-7

10。

五、注意事项

将实验菌株涂布至鉴别性培养基表面时，掌握好稀释度，尽量获得单独的单菌

落，以利于后期的筛选。

六、实验结果

1．菌落的透明圈

透明圈

2．菌落计数

淀粉浓度(g/L)菌悬液的浓度梯度菌落数平均值

1010-5110107109

10-691010

10-7353937

1510-3菌落太多无法计数/

10-4130137134

10-5