注射用重组人促卵泡激素制造及检定暂行规程.docVIP

注射用重组人促卵泡激素制造及检定暂行规程

本品系由具有高效表达人促卵泡激素基因的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞，通过细胞培养，分离和高度纯化后冻干制成。具有维持其稳定性作用的保护剂，不含防腐剂和抗生素。适应症为=1\*GB3①不排卵（涉及多囊卵巢综合症[PCOD]）且对枸橼酸克罗米酚治疗无反映的妇女。=2\*GB3②对于进行超排卵期或辅助生育技术，如体外受精－胚胎移植（IVF）、配子输卵管内移植（GIFT）和合子输卵管内移植（ZIFT）D的患者，本品可刺激多卵泡发育。

1．基本规定

1.1设施与生产质量管理

按中国《药品生产质量管理规范》规定实行。

1.2原料及辅料

应符合现行《中华人民共和国药典》2023版二部或《中国生物制品重要原辅材料质控标准》的规定。未纳入上述标准的化学试剂，应不低于化学纯。

1.3生产用水

生产用水源水应符合饮用水标准，纯化水及注射用水应符合现行《中华人民共和国药典》2023版二部标准。

1.4生产用器具

直接用于生产的金属或玻璃等器具，应通过严格清洗及去热原质解决或灭菌解决。

2．制造

2.1工程细胞

2.1.1名称及来源

重组人促卵泡激素工程细胞系由带有人促卵泡激素α和β链基因的重组质粒共转染的CHO-K1细胞系。

2.1.2种子库建立、传代及保存

从原始细胞库的细胞传代，扩增后冻存于液氮中，作为主细胞库；从主细胞库传代，扩增后冻存于液氮中，建立工作细胞库。每次传代不超过批准的代次。细胞系冻存于液氮中，检定合格后方可用于生产。

2.1.3主细胞库及工作细胞库细胞的检定

应符合“生物制品生产用动物细胞基质制备及检定规程”规定。

2.1.3.1外源因子检查

细菌和真菌（附录XIIA）、支原体（附录XIIB）、病毒检查（附录XIIC）。

2.1.3.2细胞鉴别实验

应用同工酶分析、生物化学、免疫学、细胞学和遗传学标记物等任一方法进行鉴别，应为典型CHO细胞。

2.1.3.3重组人促卵泡激素表达量

应不低于原始细胞库细胞表达量。

2.2原液

2.2.1细胞的复苏与扩增

从工作细胞库来源的细胞复苏后，于无血清、无蛋白培养基中进行传代和扩增，供转瓶或细胞培养罐接种用。

2.2.2细胞培养液

生产用培养液应不含血清、蛋白质。

2.2.3细胞培养

细胞培养全过程应严格按照无菌操作，细胞培养时间根据细胞生长情况而定。

2.2.4分离纯化

收集的培养液通过超虑法进行浓缩，经多步色谱纯化后得到高纯度的重组人促卵泡激素，即为重组人促卵泡激素原液。除菌过滤后保存于适宜温度，并规定其有效期。

2.2.5原液检定

按照3.1项进行。

2.3半成品

2.3.1配置与除菌

原液加入适宜的稳定剂，并用缓冲液稀释。除菌过滤后即成半成品。

2.3.2半成品检定

按照3.2项进行。

2.4成品

2.4.1分批

应符合“生物制品分批规程”规定。

2.4.2分装及冻干

应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。半成品应及时分装、冷冻，冻干的全过程中，制品的温度应不高于30℃

2.4.3规格

75IU/瓶。

2.4.4包装

应符合“生物制品包装规程”规定。

3检定

3.1原液检定

3.1.1性状

应为无色澄明液体

3.1.2鉴别

3.1.2.1在氧化亚基项下记录的色谱图中，供试品主峰保存时间应与对照品一致。

3.1.2.2在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保存时间应与对照品一致。

3.1.2.3肽图（至少每半年测定一次）

取本品，照附录1测定，肽图谱应与对照品一致。

3.1.2.4N末端氨基酸序列（至少每一年测定一次）：将本品烷基化解决，再经HPLC分离纯化得到?、?链后，通过Edman降解法测序，两条链N末端15个氨基酸序列分别为：?链：A-P-D-V-Q-D-C-P-E-C-T-L-Q-E-N，?链：N-S-C-E-L-T-X-I-T-I-A-I-E-K-E，其中X代表未测出氨基酸，也许有修饰？

3.1.3检查

3.1.3.1等电点

取本品，照附录2测定，等电点主区带应在3.5-5.5之间，供试品主区带应与对照品一致？。

3.1.3.2解离亚基

取本品（1.0mg/ml）50ul，加2?非还原上样缓冲液50ul，混匀即得供试品溶液；取上述供试品溶液10ul，加入190ul1?非还原上样缓冲液，混匀后100℃加热5分钟，放冷即得对照溶液（供试品溶液5%）。依法（药典2023版三部，附录IVC，考马斯亮蓝法），用非还原SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测，分离胶浓度为12.5%，供试品溶液和对照溶液各取20ul；考马斯亮蓝染色，凝胶成像仪扫描记录结果。供试品中解离亚基条带显色应不深于对照溶液中的解离亚基条带（5%）。

3.1.3.3氧化亚基

照高效液相色谱法（中国药典2023年版三部，附录IIIB）测定。