细胞活体染色技术.ppt

实验三细胞活体染色技术

实验目的：通过细胞活体染色观察动植物活细胞内液泡系和线粒体的形态、大小和位置。实验原理：活体染色是利用某些无毒或毒性很小的染料来显示细胞内某些天然结构，而不影响细胞的生命活动。活体染色分为体内活体染色和体外活体染色。

区别：体内活体染色是在有机体内部，即还原的环境中进行，而体外活体染色是在空气中，在氧化的环境中进行。

詹纳斯绿B（JanusgreenB）：能够活染线粒体为蓝色，主要是由于线粒体内膜上的细胞色素酶系使染料始终保持在氧化状态(即有色状态)，在周围的细胞质内，这些染料被还原为无色的色基(即无色状态)。

被染色的小鼠肝细胞

中性红一种弱碱性pH指示剂，变色范围在pH6.4~8.0之间(由红变黄)。在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红并向液泡中排泌，由于液泡在一般情况下呈酸性反应。因此，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，在这种情况下，原生质和细胞壁一般不着色；死细胞由于原生质变性凝固，胞液不能维持在液泡内。因此，用中性红染色后，不产生液泡着色现象。相反，中性红的阳离子，却与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。

液泡系：由膜包裹的小泡和液泡，细胞内除线粒体外都属于液泡系。植物根尖液泡的中性红染色

台盼蓝（Trypanblue）：细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性。还常用于检测细胞是否存活。活细胞不会被染成蓝色，而死细胞会被染成淡蓝色，与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方法之一。

配制台盼蓝染色液：将1g台盼蓝溶于100ml生理盐水中。生理盐水：生理学实验或临床上常用的渗透压与动物或人体血浆的渗透压相等的氯化钠溶液。即0.9％氯化钠无菌水溶液。

(一)液泡系的中性红活体染色1．用双面刀片将黄豆芽根尖(约l-2cm2)处小心纵切断面，一定要薄且均匀。2．在载玻片中央滴加中性红染料。使材料在其中染色5-10分钟。3．吸去染料，滴加Ringer氏液一滴，盖片、镜检、注意液泡系染成什么颜色，其形态、大小如何、分布位置。(二)线粒体的活体染色1．用植物细胞观察线粒体的活体染色(1)用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块(约lcm2)，放在载玻片上用1/5000詹纳斯绿B染色约30分钟。(2)吸出染液，滴加Ringer氏液，盖片、镜检，注意观察线粒体分布及所呈形状。实验步骤

2．用动物细胞观察线粒体的活体染色(1)取鼠肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液的表面皿中洗去血液。(2)将肝组织洗净后吸去血液，加入1／5000詹纳斯绿B染液染色30分钟，注意不可将组织块完全淹没。(3)染色后撕开组织块，这样溶液中就会有一些细胞或细胞群。(4)用吸管吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中。垫两根短头发，加盖玻片，即可镜检。(5)用油镜观察活染色的线粒体标本，要不断地来回转动细调焦螺旋，使盖玻片上下慢慢移动。使材料总是得到氧气，线粒体的染色才显得非常清楚。

3．人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察(1)取清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上，滴2滴1／5000詹纳斯绿B溶液。(2)用牙签取口腔上皮细胞，将刮下的粘液状物放入载玻片的染液滴中，染色10~15分钟(注意不能干燥)，盖上盖片，吸去多余的溶液，即可镜检。（三）台盼蓝染色鉴别死活细胞抽取小鼠腹腔水细胞涂于洁净载玻片上，滴加l％台盼蓝1滴，盖上盖玻片于显微镜下观察。