动物细胞融合与单克隆抗体.pptVIP

这张可以暂时不出现受精作用1动物细胞融合的概念一、动物细胞融合动物细胞融合也称细胞杂交，是指动物细胞结合形成细胞的过程。融合后形成的具有两个或多个细胞遗传信息的，称为杂交细胞。两个或多个一个单核细胞融合完成标志：细胞核融合成一个核原理：细胞膜的流动性诱导的方法：物理法：化学法：生物法：电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）灭活的病毒2动物细胞融合过程为什么灭活的病毒能作诱导剂？病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂交细胞不灭活的病毒能作为诱导剂吗？不能，因为不灭活的病毒会感染细胞。灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏这些病原体的抗原结构。3动物细胞融合技术的意义和应用意义：突破有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。最重要的用途是制备单克隆抗体4植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性植物细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理法（离心、振动、电激）化学法（聚乙二醇）物理法、化学法（同左）灭活的病毒获得杂种细胞，重要用途制备单克隆抗体强调：浆细胞是能够产生抗体的B淋巴细胞，下文将其简称为B淋巴细胞抗体：能够与抗原发生_____结合的__________。主要分布在。能产生抗体的细胞是___________________二、单克隆抗体B细胞浆细胞记忆B细胞分化免疫球蛋白浆细胞（即效应B细胞）特异性血清自主阅读P52：用传统的方法如何获得抗体？抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的缺陷：产量、，且抗体的。多种B淋巴细胞动物体内多种抗体抗原反复注射单克隆抗体！低纯度低特异性差读下面一段资料，找出单克隆抗体的概念人们发现，动物在免疫反应的过程中，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。要想获得大量的单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，即克隆。1单克隆抗体的概念单克隆抗体：单个B淋巴细胞进行无性繁殖形成的细胞群，产生的化学性质单一，特异性强的抗体。提示1：对B淋巴细胞进行细胞培养可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？问题：如何大量生产单克隆抗体？请尝试设计一个方案。2单克隆抗体的制备

提示3：有什么方法能使B淋巴细胞也具有这样的能力呢？一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞能无限增殖杂交瘤细胞动物细胞培养技术设计方案：动物细胞融合技术单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量增殖的细胞1975年英国科学家米尔斯坦和柯勒的实验①为什么给小鼠注射羊的红细胞？②细胞两两融合后，产生几种融合细胞？③杂交瘤细胞是如何筛选出来的？有何特点？④如何得到大量杂交瘤细胞？⑤是否所有的杂交瘤细胞都能产生所需专一性抗体？⑥利用杂交瘤细胞得到大量单克隆抗体的两条途径？阅读课本p53-54已经免疫几种类型？（一选）即要在选择性培养基上筛选出杂交瘤细胞淘汰克隆化培养和抗体检测专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性在具有筛选作用的培养基上培养骨髓瘤细胞免疫小鼠注射特定的抗原蛋白培养骨髓瘤细胞单克隆抗体单克隆抗体体外培养使其数量增殖：动物细胞培养体外培养小鼠腹腔内培养◆涉及技术：动物细胞培养动物细胞融合方法：用专一抗原与这些细胞产生的抗体结合注意：两种筛选的方法和目的不同单克隆抗体的制备获得产生相应抗体的B淋巴细胞BB、B瘤、瘤瘤（融合的细胞有3种）√细胞培养液小鼠腹水(二选)筛选出能产生所需专一抗体的杂交瘤细胞3单克隆抗体的应用（1）作为诊断试剂——最广泛应用单克隆抗体最主要的优点：特异性强，灵敏度高，并能大量制备。单克隆抗体的应用：准确、高效、简易、快速（如同位素标记单克隆抗体，可定位诊断肿