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附试验(ELISA)与聚合酶链式反应(PCR)
病毒是以细胞为宿主,并以该宿主细胞的代谢作为生存依据的生
物。由于其微小的体型和嗜生特性,病毒常常会潜伏在人体内多年,
甚至终身不愈。而这种情况会带来许多的健康问题以及社会问题。因
此了解病毒的相关信息是非常重要的。对于病毒检测来说,酶联免疫
吸附试验(ELISA)和聚合酶链式反应(PCR)是常见的方法。本文将
分析这两种方法的优缺点,以此帮助我们更好地了解它们的应用及其
适用范围。
一、酶联免疫吸附试验(ELISA)
ELISA是一种常见的病毒检测实验方法,适用于多种病原微生物、
细胞因子及荷尔蒙的检测。其操作简单、灵敏度高、准确性较好,并
且适用范围较广。
ELISA包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等多种形式,其
具体步骤如下:
将待检物质加入到已知化合物(即抗原或抗体)涂覆的孔板上;
2.孔板中的化合物与待检物质结合(如果是抗原与待测抗体结
合),形成复合物;
3.孔板洗涤去除未结合的化合物;
4.添加检测标签(如酶)标记的二抗(即特异抗体),与复合物
结合;
5.孔板再次洗涤去除未结合的标记化抗体;
6.加入显色试剂使结合的酶反应产生颜色。
ELISA方法包括直接ELISA、间接ELISA、竞争ELISA等。
ELISA的优点:
1.ELISA方法灵敏度较高,能够检测到低浓度的病毒。
2.操作简单、快速、适用范围广泛。
3.具有良好的灵敏度和特异性。
4.ELISA试剂盒的制备和多孔板处理过程已成规模化生产,价格也
逐渐变得负担得起。
的缺点:
1.ELISA方法很难检测出病毒的亚型。
2.在复杂的样品里,ELISA方法可能出现假阴性或假阳性结果。
3.ELISA方法不适用于大型的病毒颗粒,或者是样品中含有被病毒
感染的细胞。
二、聚合酶链式反应(PCR)
PCR方法是在1983年由Mullis发明的一种可以扩增DNA序列的技
术。该技术对于病毒检测来说具有极高的灵敏度,能够在非常短的时
间内扩增目标DNA序列,并对其进行探测和测量。
PCR也分为定性和定量两种方式,其基本步骤如下:
1.样品前处理:如病毒RNA/DNA的提取、分离等。
2.扩增阶段:在PCR扩增液中加入反向引物和正向引物及
Taqpolymerase,使目标DNA序列得到扩增。
3.产物检测:通过PCR扩增结果判断反应阳性及阴性。
PCR方法具有如下优点:
方法适用于多种类型的病毒检测。
2.在短时间内可以扩增出目标DNA序列,并进行高灵敏度的检测。
3.PCR方法可以同时检测多个病原体。
4.PCR方法灵敏度较高,能够检测到极微量的病毒。
PCR方法的缺点:
1.需要较多的实验条件和设备。
2.PCR方法对于样品纯净度、稳定性非常敏感。
3.PCR试剂箱容易有污染,容易出现假阳性假阴性结果。
4.PCR卡特掉测购买成本高,也不太适合同步大规模病毒跟踪。
综上所述,ELISA和PCR两种方法各具优缺点。在实际的病毒检测
中,应根据具体的检测要求和条件来选择合适的方法。对于大规模病
毒检测,一般会采用ELISA方法;而对于特定病毒的检测,一般则会
采用PCR方法。
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