核酸检测原理及方法.pptx

汇报人：XXX2024-01-26THEFIRSTLESSONOFTHESCHOOLYEAR核酸检测原理及方法

目CONTENTS核酸检测基本概念核酸检测原理常见核酸检测方法样本采集、保存和运输要求实验室建设与管理规范核酸检测在疫情防控中应用录

01核酸检测基本概念

核酸定义核酸是生物体内的重要遗传物质，分为脱氧核糖核酸（DNA）和核糖核酸（RNA）两大类。DNA与RNA的区别DNA主要存在于细胞核中，是遗传信息的携带者；RNA主要存在于细胞质中，参与蛋白质合成等过程。核酸定义与分类

通过检测样本中的核酸序列，可以判断生物体的遗传信息、病毒感染等情况，为疾病诊断、治疗及疫情防控提供重要依据。核酸检测意义核酸检测广泛应用于医学、生物学、农学等领域，如新冠病毒检测、基因测序、农作物病虫害防治等。应用领域核酸检测意义及应用领域

扩增通过特定的酶作用，使核酸片段在数量上增加的过程，如PCR扩增。探针用于检测特定核酸序列的标记分子，与目标序列结合后产生可检测的信号。引物用于核酸扩增的短片段，与模板核酸互补配对。基因组生物体所有遗传物质的总和，包括DNA和RNA。基因序列核酸中碱基的排列顺序，决定生物体的遗传特征。相关术语解析

01核酸检测原理

从待检测的生物样本中采集核酸，如咽拭子、血液、组织等。样本采集核酸释放核酸纯化通过化学或物理方法破坏细胞膜和核膜，使核酸从细胞中释放出来。利用特定的结合剂或吸附剂去除杂质，如蛋白质、多糖等，得到纯净的核酸。030201核酸提取与纯化过程

通过特定的引物和酶，将目标核酸片段进行指数级扩增，以便后续检测。根据扩增原理和反应条件的不同，可分为PCR（聚合酶链式反应）、LAMP（环介导等温扩增）、NASBA（核酸序列依赖性扩增）等。扩增技术原理及分类扩增技术分类扩增技术原理

利用荧光探针、酶切反应等原理，对扩增产物进行标记和信号识别。信号识别根据信号的有无、强弱等特征，判断样本中是否存在目标核酸片段，以及片段的数量或浓度。同时，需要结合阴性对照和阳性对照的结果，确保检测的准确性和可靠性。结果判定信号识别与结果判定

01常见核酸检测方法

实时荧光定量PCR法原理通过荧光标记的特异性引物和探针，在PCR扩增过程中实时监测荧光信号的变化，从而实现对目标核酸的定量检测。优点灵敏度高、特异性强、可定量检测。缺点需要昂贵的荧光标记试剂和检测设备，且对实验操作人员技术要求较高。

原理01将待测核酸样本分散到大量独立的反应单元中，每个反应单元包含一个或多个目标核酸分子，然后进行PCR扩增和荧光检测，最后根据泊松分布原理对目标核酸进行绝对定量。优点02灵敏度高、特异性强、可绝对定量。缺点03需要复杂的微流控芯片和精密的液滴生成技术，且对实验操作人员技术要求较高。数字PCR法

原理利用特定的等温扩增酶，在恒温条件下实现核酸的快速扩增，然后通过荧光或比色等方法进行检测。优点操作简便、快速高效、不需要昂贵的PCR仪。缺点灵敏度相对较低，且容易受到非特异性扩增的干扰。等温扩增技术

123利用CRISPR-Cas系统的特异性识别能力，结合荧光或比色等方法进行检测，具有灵敏度高、特异性强等优点。CRISPR-Cas检测技术环介导等温扩增技术，利用特定的引物和酶在恒温条件下实现核酸的快速扩增，具有操作简便、快速高效等优点。LAMP技术核酸序列依赖性扩增技术，利用特定的引物和酶在恒温条件下实现RNA的快速扩增，具有灵敏度高、特异性强等优点。NASBA技术其他新型技术介绍

01样本采集、保存和运输要求

使用特制的鼻咽拭子，在患者鼻咽部分泌物中采集样本。采集时需旋转拭子并停留数秒，确保收集到足够的细胞。鼻咽拭子用无菌棉拭子在患者咽后壁、扁桃体隐窝等部位擦拭采集分泌物。注意擦拭时力度适中，避免损伤黏膜。咽拭子要求患者深咳后，将咳出的痰液收集于无菌容器中。注意避免唾液污染。深咳痰液通过纤维支气管镜进行肺泡灌洗，收集灌洗液。此方法较复杂，需专业医生操作。肺泡灌洗液样本类型选择及采集方法

样本应保存在2-8℃的冰箱中，以防止病毒降解和失活。保存温度使用无菌、密封良好的容器保存样本，避免交叉污染。保存容器根据病毒特性和检测方法的要求，样本的有效期一般为24-72小时。超过有效期的样本可能会影响检测结果的准确性。有效期保存条件和有效期设置

包装要求样本应使用三层包装系统，包括主容器、第二容器和运输容器。主容器应密封良好，防止泄漏；第二容器应提供足够的吸收材料，以吸收可能的泄漏；运输容器应坚固、防漏，并贴上生物危害标签。运输温度在运输过程中，应确保样本处于适当的温度范围内（2-8℃），以防止病毒降解和失活。可使用冰袋或冷藏箱进行保温。运输文件随样本附上完整的运输文件，包括患者信息、样本类型、采集时间、保存条件、有效期等，以便接收方准确处