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汇报人：XXX

核酸检测实验室方法

2024-01-26

目录

引言

核酸检测实验室基本设施

核酸提取方法

核酸检测技术

核酸检测实验流程

核酸检测实验室质量控制

总结与展望

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引言

Chapter

新冠病毒等传染病的爆发，使得核酸检测成为疫情防控的重要手段。

疫情防控

精准医学

实验室研究

随着精准医学的发展，核酸检测在疾病诊断和治疗中的应用越来越广泛。

核酸检测是生物学、医学等领域实验室研究的基础手段之一。

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目的和背景

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早期诊断

核酸检测能够在病毒感染初期就进行检测，实现早期诊断。

疫情监控

核酸检测可以实现对疫情的实时监控，为防控策略的制定和调整提供数据支持。

精准治疗

通过核酸检测可以确定病原体的种类和数量，为精准治疗提供依据。

无症状感染者筛查

核酸检测能够检测出无症状感染者，有效阻断病毒的传播链。

核酸检测的意义

02

核酸检测实验室基本设施

Chapter

核酸检测实验室应分为试剂准备区、样本制备区、扩增分析区，各区域间应有明确的物理隔断，确保空气流向和压差控制。

实验室布局

用于从样本中提取核酸，常用设备包括自动核酸提取仪、离心机等。

核酸提取设备

用于扩增核酸片段，常用设备为实时荧光定量PCR仪。

扩增设备

用于检测扩增产物，如荧光检测仪、凝胶成像系统等。

检测设备

实验室布局与设备

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用于从样本中提取核酸，包括裂解液、洗涤液、洗脱液等。

核酸提取试剂

用于核酸扩增，包括引物、dNTPs、Taq酶等。

PCR试剂

用于实时荧光定量PCR检测，特异性标记目标核酸片段。

荧光探针

包括离心管、吸头、PCR管等一次性使用的实验室耗材。

耗材

试剂与耗材

实验室生物安全等级

个人防护

废弃物处理

消毒与灭菌

核酸检测实验室应符合生物安全二级（BSL-2）或以上标准。

实验废弃物应按照生物安全要求进行分类、处理和处置，防止交叉污染和环境污染。

实验人员应穿戴工作服、口罩、手套等个人防护用品，避免直接接触样本和试剂。

定期对实验室环境、设备和工作台面进行消毒和灭菌处理，确保实验室环境安全。

03

核酸提取方法

Chapter

使用酚和氯仿的混合物对核酸进行抽提，通过离心分离核酸与蛋白质等杂质。

酚/氯仿抽提法

在核酸溶液中加入乙醇，使核酸从溶液中析出，然后通过离心收集核酸沉淀。

乙醇沉淀法

利用硅胶柱或玻璃珠等固相载体，将核酸与杂质分离，通过洗脱液将核酸从柱上洗脱下来。

柱层析法

利用磁珠表面的特异性吸附剂与核酸结合，通过磁场作用将磁珠与溶液分离，实现核酸的自动化提取。

磁珠法

使用特制的硅胶膜吸附核酸，通过自动化仪器控制液体流过硅胶膜，将核酸与杂质分离。

硅胶膜法

在微流控芯片上集成核酸提取步骤，通过控制液体在芯片内的流动，实现核酸的自动化、高通量提取。

微流控芯片法

自动化核酸提取方法

核酸提取的注意事项

防止核酸降解

在提取过程中应避免核酸酶的污染，使用无核酸酶的试剂和耗材，同时操作要迅速、低温进行。

提高核酸纯度

尽量减少蛋白质、多糖等杂质的污染，以提高后续核酸检测的准确性。

确保核酸完整性

避免使用过于剧烈的处理方法，以免破坏核酸的结构完整性。

04

核酸检测技术

Chapter

优点

灵敏度高、特异性强、可定量检测、操作简便等。

原理

利用荧光基团标记的特异性引物或探针，在PCR扩增过程中实时监测荧光信号的变化，从而实现对目标核酸的定量检测。

应用

广泛应用于病原体检测、基因表达分析、SNP分型等领域。

实时荧光PCR技术

原理

01

将PCR反应体系分散到大量独立的微反应单元中，每个单元包含一个或少数几个目标分子，通过计数阳性反应单元的数量实现对目标核酸的绝对定量。

优点

02

无需标准曲线、绝对定量、高灵敏度、高精确度等。

应用

03

适用于稀有突变检测、基因拷贝数变异分析、病毒载量测定等场景。

数字PCR技术

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利用特殊设计的引物和酶，在恒温条件下实现核酸的快速扩增，适用于现场快速检测和即时诊断。

恒温扩增技术

将大量特异性探针固定在芯片表面，通过与目标核酸的杂交反应实现对多个目标的同时检测。

基因芯片技术

利用纳米孔道对单分子DNA或RNA进行测序，具有高通量、长读长、无需PCR扩增等优点。

纳米孔测序技术

其他核酸检测技术

05

核酸检测实验流程

Chapter

将保存好的样本在规定时间内送至实验室进行检测。

遵循无菌操作原则，使用专用采样拭子或采集管进行样本采集。

根据病毒特性选择合适的样本类型，如咽拭子、鼻拭子、痰液、血液等。

将采集的样本保存在专用保存液中，确保病毒核酸不被降解。

采集方法

样本类型

样本保存

样本运输

样本采集与处理

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核酸浓度测定

使用分光光度计或荧光定量仪等设备对纯化后的核酸进行浓