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Survivin反义寡核苷酸对K562细胞耐药性的研究的开题报告

题目：Survivin反义寡核苷酸对K562细胞耐药性的研究

一、研究背景

细胞耐药性是肿瘤化疗失败的一个主要原因。目前，针对肿瘤细胞耐药性的研究日趋成熟，其中Survivin作为一种重要的抗凋亡蛋白，在抗肿瘤过程中发挥了关键的作用。Survivin是一种含有BIR（BaculovirusIAPRepeat）结构域的蛋白，它可以结合Caspase3、Caspase7等凋亡因子，从而抑制细胞凋亡。Survivin在大多数癌细胞中高表达，并与肿瘤的恶性程度、患者预后相关。因此，治疗肿瘤时抑制Survivin表达是一种被普遍研究的策略。

二、研究目的

本研究旨在探讨Survivin反义寡核苷酸对K562细胞的耐药性和生长抑制作用。

三、研究方法

1.细胞株和培养条件：将K562细胞分别在RPMI1640中加入10%的胎牛血清、100μg/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素，细胞密度为10^5/mL，culturingat37℃in5%CO2；

2.SurvivinsiRNA设计和合成：根据SurvivinmRNA序列设计并合成SurvivinsiRNA，经基因测序实验室验证；

3.细胞转染：通过脂质体法将SurvivinsiRNA转染至K562细胞中；

4.Westernblot：Westernblot沉淀K562细胞清液，运用Survivin，Bcl-2，Bax，Caspase3等蛋白抗体进行Westernblot分析和定量；

5.CELLSCountingKit-8（CCK-8）细胞活性检测，采用K562细胞，利用CCK-8检测几个时间点（12h、24h、48h）下细胞的生长状态；

6.流式细胞术分析：采用AnnexinV-FITC/PI染料，分析K562细胞在SurvivinsiRNA转染下的凋亡情况。

四、研究预期

本研究将有效降低Survivin在K562细胞中的表达水平，从而观察Survivin在肿瘤细胞中的生长抑制作用以及对肿瘤细胞的耐药性的影响。最终，预计可以为临床肿瘤治疗提供新的研究和临床治疗思路。