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乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白单克隆抗体的制备及鉴定的开题报告

一、选题背景及意义：

乙型脑炎是由乙型脑炎病毒引起的急性传染病，常见于夏秋季节。我国是乙型脑炎流行区，每年多地有发病或死亡报告。乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白作为病毒的主要抗原，是疫苗中重要的抗原成分，因此其制备和鉴定显得尤为重要。

二、研究目的：

本研究旨在制备乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白单克隆抗体，为病毒的诊断和疫苗研制提供重要的实验依据和技术支持。

三、研究方法：

（1）病毒培养

选择经典的乙型脑炎病毒作为实验对象，采用Vero细胞进行病毒培养，获得足够的病毒量作为抗原。

（2）EDⅢ蛋白表达和纯化

采用重组DNA技术，构建EDⅢ蛋白表达载体，转染到CHO细胞中，利用Westernblot对细胞培养上清进行检测和鉴定，通过His-tag纯化技术纯化EDⅢ蛋白。

（3）小鼠免疫和单克隆抗体制备

将纯化后的EDⅢ蛋白作为免疫原，注射小鼠进行免疫，根据抗体水平选择高水平小鼠提取脾细胞进行细胞融合，构建杂交瘤。经过三次克隆筛选后，获得单克隆抗体。

（4）单克隆抗体鉴定

采用ELISA、Westernblot等技术对制备的单克隆抗体进行鉴定，确定其免疫活性和特异性。

四、预期结果：

本研究预期能够成功制备乙型脑炎病毒EDⅢ蛋白单克隆抗体，该抗体具有高度特异性和敏感性，可用于病毒的诊断和疫苗的研制。

五、实验进度：

目前已完成乙型脑炎病毒的培养和EDⅢ蛋白的表达和纯化，正在进行小鼠免疫和单克隆抗体制备。预计明年5月完成全部实验内容和鉴定工作。