菌种保藏-教学课件.pdfVIP

北京科技大学

环境工程

微生物学

李冰

菌种保藏

菌种的保藏

⚫产生背景

菌种在其生长发育过程中可能发生“基因突变”或“诱变”，导致菌种退化

⚫退化表现：形态、生理生化特性

⚫措施

1）选育时使用孢子或单核菌珠，充分培养和分离纯化；

2）优化培养条件，有利于生产菌株生长，不利于退化菌株生长；

3）定期复壮：在菌种退化后，通过纯种分离和性能测定，从退化菌株中找未

退化的个体；

4）保藏菌种；

菌种的保藏方法

（1）斜面低温保藏法（2）甘油冷冻管保藏法

（3）石蜡油封藏法（4）砂土管保藏法

（5）冷冻真空干燥保藏法（6）液氮超低温保藏法

（1）斜面低温保藏法

⚫又称定期移植法，是常用的保藏方法之一。

⚫将菌种接种在适宜的斜面培养基上，待菌种生长完全后，置于4℃左右的冰

箱中保藏，每隔一定时间（保藏期）再转接至新的斜面培养基上，生长后

继续保藏，如此连续不断。

大肠杆菌金黄色葡萄球菌白色念珠菌

（1）斜面低温保藏法

⚫特点：

此法广泛适用于各大类微生物菌种的短期保藏；

斜面菌种：4℃，相对湿度60-70%，3-6月移植一次；

半固体穿刺菌种：冰箱，6-12个月；

优点：简便易行，容易推广，存活率高；

缺点：菌株仍有一定程度的代谢活动能力，保藏期短，

传代次数多，菌种较容易发生变异和被污染.

（2）甘油冷冻管保藏法

⚫将菌种悬浮在甘油蒸馏水中，置于低温下保藏，本法较简便，但需置备低

温冰箱。保藏温度若采用－20℃，保藏期约为0.5～1年，而采用-70~-

80℃，保藏期可达10年。

⚫该方法应用广泛，实验室常用的保藏菌种的方法；基因工程菌也常采用本

法保藏。

⚫具体方法：将拟保藏菌种对数期的培养液直接与经121℃蒸汽灭菌20min

的甘油混合，并使甘油的终浓度在10％-30%，再分装于小离心管中，置低

温冰箱中保藏。

（3）石蜡油封藏法

⚫在无菌条件下，将灭过菌并已蒸发掉水分的液体石蜡倒入培养成熟的

菌种斜面（或半固体穿刺培养物）上，石蜡油层高出斜面顶端1cm，

使培养物与空气隔绝，加胶塞并用固体石蜡封口后，垂直放在室温或

4℃冰箱内保藏。

此法广泛适用于各大类微生物菌种的中期保藏，不适用于保藏

某些能分解烃类的菌种。

此法的主要保藏措施是低温、阻氧。一般可保存1～2年左右。

（4）砂土管保藏法

⚫该法是将砂与土分别洗净、烘干、过筛，按一定比例

分装于小试管中，砂土的高度约1cm，121℃蒸汽灭

菌1～1.5h，间歇灭菌3次。50℃烘干后经检查无误

后备用。

⚫将待保藏的菌株制成菌悬液或孢子悬液滴入砂土管中，

放线菌和霉菌也可直接刮下孢子与载体混匀，而后置

于干燥器中抽真空约2～4h，用火焰熔封管口(或用

石蜡封口)，置于干燥器中，在室温或4℃冰箱内保藏。

（4）砂土管保藏法

特点：

一种常用的长期保藏菌种的方法，适用于产孢子的微生物

及形成芽孢的细菌，对于一些对干燥敏感的细菌及酵母则

不适用。

砂土管法兼具低温、干燥、隔氧和无营养物等诸条件，

故保藏期较长、效果较好，且微生物移接方便，经济简

便。它的保藏期约1～10年。

（5）冷冻真空干燥法

⚫简称冻干法。它通常是用保护剂（脱脂牛奶或马血清）制备拟保藏菌种的

细胞悬液或孢子悬液于安瓿管中，再在低温下快速将含菌样冻结，并减压

抽真空，使水升华将样品脱水干燥，形成完全干燥的固体菌块。并在真空

条件下立即熔封，造成无氧真空环境，最后置于低温（4度）下，使微生物

处于休眠状态，而得以长期保藏。

⚫特点：

适用于各大类微生物。