分子发光荧光与磷光.ppt

芳香族化合物存在共轭的不饱和体系，是有机化合物荧光测定的主要类型。２.有机化合物待测物试剂λexmaxλemmax测定范围ppm丙三醇苯胺紫外蓝色0.1~2糠醛蒽酮4655051.5~15氨基酸氧化酶3154250.01~50维生素A无水乙醇3454900~20蛋白质曙红丫紫外5400.06~6肾上腺素乙二胺4205250.001~0.02青霉素α-甲氧基-６-氯-９-(β-氨乙基)-氨基氮杂蒽4205000.0625~0.625玻璃酸梅3-乙酰氧基吲哚3954700.001~0.033胍基丁胺邻苯二醛3654700.05~5四氧嘧啶苯二胺36548510-43.生命与生物物质第53页,共75页，2024年2月25日，星期天紫外-可见分光光度计:光源样品池单色器检测器数据处理仪器控制荧光(磷光)分光光度计:光源样品池激发单色器检测器数据处理仪器控制发射单色器第54页,共75页，2024年2月25日，星期天紫外-可见分光光度计

测量池(吸收池)荧光分光光度计样品池I0ItI0ItIF,p第55页,共75页，2024年2月25日，星期天7.5化学发光分析第56页,共75页，2024年2月25日，星期天一、基本原理1.化学发光反应在化学反应过程中，某些化合物接受能量而被激发，从激发态返回基态时，发射出一定波长的光。A+B=C+D*D*→D+h?（1）能够发光的化合物大多为有机化合物，芳香族化合物；（2）化学发光反应多为氧化还原反应，激发能与反应能相当?E=170～300kJ/mol；位于可见光区；（3）发光持续时间较长，反应持续进行；化学发光反应存在于生物体(萤火虫、海洋发光生物)中，称生物发光(bioluminescence)。第57页,共75页，2024年2月25日，星期天2.化学发光效率化学效率：发光效率：时刻t的化学发光强度(单位时间发射的光量子数)：dc/dt分析物参加反应的速率；第58页,共75页，2024年2月25日，星期天3.化学发光强度与化学发光分析的依据在化学发光分析中，被分析物相对于发光试剂小得多，对于一级动力学反应：dc/dt=Kc；K为反应速率常数。定性依据：（1）在一定条件下，峰值光强度与被测物浓度成线性；（2）在一定条件下，曲线下面积为发光总强度(S)，其与被测物浓度成线性：第59页,共75页，2024年2月25日，星期天4.化学发光反应的类型（1）气相化学发光反应a.一氧化氮与O3的发光反应NO+O3→NO2*NO2*→NO2+h?发射的光谱范围：600～875nm，灵敏度1ng/cm-3；b.氧原子与SO2、NO、CO的发光反应O3→O2+O（1000?C石英管中进行）SO2+O+O→SO2*+O2SO2*→SO2*+h?最大发射波长：200nm；灵敏度1ng/cm-3；第60页,共75页，2024年2月25日，星期天O3→O2+O（1000?C石英管中进行）NO+O→NO2*NO2*→NO2+h?发射光谱范围：400～1400nm；灵敏度1ng/cm-3；氧原子与CO的发光反应：CO+O→CO2*CO2*→CO2+h?发射光谱范围：300～500nm；灵敏度1ng/cm-3；氧原子与NO的发光反应：第61页,共75页，2024年2月25日，星期天c.乙烯与O3的发光反应乙烯与O3反应，生成激发态乙醛：CH2O*→CH2O+h?最大发射波长：435nm；对O3的特效反应；线性响应范围1ng/cm-3～1?g/cm-3；第62页,共75页，2024年2月25日，星期天（2）火焰中的化学发光反应