分子发光荧光磷光及化学发光.ppt

*这个反应的发射光谱范围为666~875nm，灵敏度可达1ng/ml。也可同时测定大气中NO2的含量，将NO2还原为NO，测定二者的总量，再减去NO的量。液相化学发光的几种体系：鲁米诺、光泽精、过氧化草酸酯第85页,共105页，2024年2月25日，星期天*（3）异相化学发光和生物化学发光异相化学发光如在含有罗丹明B和没食子酸的硅胶上，O3与没食子酸反应生成高能中间体A*，然后将能量转移给罗丹明B接受体而发光。该反应用于气球探测器或气相卫星上，以便测定大气或同温层的O3含量。第86页,共105页，2024年2月25日，星期天*生物化学发光荧火虫素与三磷酸腺苷（ATP）反应，在萤火虫素酶（E）与Mg2+存在时生成萤火虫素与一磷酸腺苷（AMP）的复合物和焦磷酸镁，然后复合物与氧发生化学发光反应，φCL接近于1。该体系可测定2×10-17mol·L-1的ATP，这相当于一个细菌的ATP含量，灵敏度很高，选择性很好。第87页,共105页，2024年2月25日，星期天*４．鲁米诺化学发光反应的机理在常用的化学发光分析的发光物质中，鲁米诺的应用最广泛。深入的研究已经给出鲁米诺化学发光反应机理的初步模式。它产生化学发光反应的ψCE为0.01~0.05。第88页,共105页，2024年2月25日，星期天鲁米诺氧化发光原理hv(λmax=425nm）3-氨基苯二甲酰环肼第89页,共105页，2024年2月25日，星期天*鲁米诺（3-氨基苯二甲酰环肼）在碱性溶液中可被一些氧化剂氧化，产生最大发射波长为425nm的化学发光。发光过程有两种方式，即单电子氧化和双电子氧化，单电子氧化得到中间体鲁米诺游离基；双电子氧化得到中间体叠氮醌，而最后发光体是3-氨基邻苯二甲酸根阴离子。在碱性溶液中，I2与鲁米诺的化学发光反应属于双电子氧化过程，该化学发光体系可检测碘的浓度低达5?10-10mol·L-1。第90页,共105页，2024年2月25日，星期天*金属离子催化鲁米诺-H2O2体系的化学发光反应大都属于单电子氧化过程。例如：Mn++HO2-→Mn+·HO2-Mn+·HO2-+鲁米诺＋H2O→M(n+1)++鲁米诺游离基＋3OH-鲁米诺游离基+HO2-→化学发光上述历程中Mn+（如Co2+）参与了反应，价态升高，本身是还原剂。第91页,共105页，2024年2月25日，星期天*４．液相化学发光的测量仪器大多数化学发光和生物发光测量仪器称为光度计，因为这类仪器只有光电检测，没有单色器提供光色散。也有人称这类仪器为发光光度计。商品名称则更为多种多样。液相化学发光的一个重要优点是仪器比较简单，一般仅有进样系统和检测系统组成。第92页,共105页，2024年2月25日，星期天化学发光仪示意图第93页,共105页，2024年2月25日，星期天*（1）进样系统进样系统包括化学发光反应池、试样注射器、聚光和控温装置等。保证试样能在反应池内均匀混合，产生的光辐射供检测系统检测。进样分静态注射和流动注射两种方式。ａ．试样反应池反应池的材料可根据不同要求选择玻璃、石英或塑料等，池的形状要与光电管的有效接受面积相匹配。若为流动分析则形状、大小都有严格要求。第94页,共105页，2024年2月25日，星期天*ｂ．进样器在静态注射进样方式中，进样器通常为微量吸量管或各种形式的注射器，容积从微升到毫升不等。若为流动注射进样方式，用泵代替注射器或加有注射阀。第95页,共105页，2024年2月25日，星期天*ｃ．聚光装置为了提高检测效率，通常在试样池的后方装一聚光装置。这种装置可以是凹面镜，简单的也可用一平面镜，也可直接在池子外面半圆圈周上镀一个镜面，使化学反应的光辐射能有效地到达光电管接受面。好的聚光装置可使进入检测器的光达50%。第96页,共105页，2024年2月25日，星期天*ｄ．进样方式在静态注射进样方式中，可以是反应物混合后最后注入分析物，也可以是分析物与介质混合后再注入反应物。应根据分析要求和反应体系特点，选择最佳进样程序。静态进样的优点在于反应条件容易选择且使用方便，仪器价格也较低廉。第97页,共105页，2024年2月25日，星期天*（2）检测系统检测系统包括光电转换、信号放大、信号处理和数据显示等部分。光信号转换为电信号由光电倍增管来完成。对于某一特殊用途的仪器，仅要求检测器的光谱响应最大值与指定应用体系的化学发光光谱峰值相同或相近即可；对通用仪器，则管子光阴极的光谱响应范围越宽越好，以适应各种不同的发光体系。