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Pib基因启动子3端缺失体的暗诱导特性分析的开题报告

题目：Pib基因启动子3端缺失体的暗诱导特性分析

背景：

Pib基因编码了水稻中抗害菌蛋白质的受体，是水稻中的一个重要抗病基因。先前的研究表明，Pib基因的启动子区域对于基因的转录调控以及抗病性有着重要作用。本研究致力于研究Pib基因启动子3端缺失体的暗诱导特性，为进一步研究Pib基因的抗病机制提供依据。

目的：

1.构建Pib基因启动子3端缺失体的表达载体

2.对比分析Pib基因启动子3端缺失体和完整启动子的转录活性

3.研究Pib基因启动子3端缺失体的暗诱导特性

方法：

1.定向PCR扩增Pib基因启动子3端缺失片段，并进行酶切与连接，构建表达载体pCAMBIA1301-Pib-?3UTR::GUS

2.将pCAMBIA1301-Pib-?3UTR::GUS和完整启动子载体pCAMBIA1301-Pib::GUS转化入水稻品种Nipponbare中，进行叶片染色体理化和GUS染色实验

3.对转化后的水稻植株进行不同光照处理，分别得到不同暗处理时间下的GUS活性值，分析Pib基因启动子3端缺失体的暗诱导特性

计划时间表：

第1-2周：设计引物并进行Pib基因启动子3端缺失片段的扩增；

第3-4周：克隆Pib基因启动子3端缺失体表达载体，进行测序验证；

第5-6周：水稻高效转化，并筛选出单一转化子；

第7-8周：对转化后的水稻植株进行叶片染色实验，并提取GUS酶活液；

第9-10周：进行GUS染色实验，并分离叶片细胞测定GUS活性；

第11-12周：分析Pib基因启动子3端缺失体和完整启动子的转录活性；

第13-14周：进行不同光照处理，分析Pib基因启动子3端缺失体的暗诱导特性；

第15-16周：总结实验结果，撰写论文；

参考文献：

1.ChenS,etal.(2015)TheevolutionarydynamicsofPifhistorisystemsinrice.GenomeBiolEvol7(12):3488-3500.

2.ZhouY,etal.(2012)ExpressionanalysisofPibinriceandfunctionalanalysisofitspromoterintransgenicrice.TheorApplGenet124:685-695.