免疫分析及免疫传感器.ppt

**CLIA是继酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）和时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）之后发展的一项新兴测定技术。**微粒子化学发光免疫分析（ECIA）也是一种酶免疫分析，用磁珠作为固相载体，增加反应体积和分离效率。标记的酶多为ALP。****它是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程。**它如同酶免疫测定中的底物，配入缓冲液中，是ECLI反应中的电子供体。******发光剂[Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●，这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。

发光标记物不被消耗，可以循环发光，这一过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，使光信号得以增强。**酶免技术（EIA）、放免技术（RIA）、荧光免疫技术（FIA）、时间分辨荧光免疫技术（TRFIA）一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，实际上包括了电化学和化学发光二个过程,其中应用了“亲和素-生物素”放大系统，使检测的灵敏度大大提高**用抗原或抗体包被磁颗粒,与标本中相应抗原或抗体和酶标的抗体或抗原通过一定模式的免疫学反应后,最终通过磁场将结合酶标记物IC和游离酶标记物进行分离的技术。**结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2++N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中孵育9分钟。

三联吡啶钌标记抗体和生物素标记抗体与待测标本同时加入一个反应杯中孵育反应4.7.3伏安免疫分析电化学免疫传感器通常是将免疫复合物固定在单根电极上，然后利用免疫复合物的标记物在同一电极上进行检测。最近，在电化学免疫分析中采用交叉梳状阵列（IDA）微电极作为转换器变得比较普遍。简单的IDA设计包括一对交叉梳状的微电极“手指”。当IDA用于伏安分析中的传感电极时，两个相互交叉的梳状电极通常采用不同的电位使电活性物质进行氧化还原循环来检测。第149页,共166页，2024年2月25日，星期天图4.164-AP和4-QI在IDA电极体系中相邻“手指”之间的氧化还原循环在两个IDA电极中的一个加上氧化电位，使4-AP发生两电子氧化反应，生成4-QI。另一个电极上加较负的电位，4-QI扩散到这个电极上后被还原成4-AP，在下一个相邻的电极上又发生氧化反应。优点是相对于背景电流来说，法拉第电流被放大，从而提高信噪比，降低检测限，提高灵敏度。4-APP4-AP4-QI第150页,共166页，2024年2月25日，星期天Thomas等利用含有相距1.6μm、2.4μm宽的25对铂微电极作为检测器，用于免疫分析中检测鼠IgG。与单电极检测相比，信号放大了4倍，氧化还原信号产生率为87%，鼠IgG的检测限为3.5fmol。第151页,共166页，2024年2月25日，星期天4.7.4阻抗免疫分析及免疫传感器在4.4节介绍了抗体在电极表面不同的固定方法，这是在电化学免疫传感器表面构筑理想的免疫复合物的第一步。通过抗体与抗原之间的特异性分子识别，免疫传感器表面的界面电荷、电容、电阻、质量以及厚度都会发生变化。这就激发了人们的兴趣，根据这些界面变化寻求电化学技术，以定量检测待测物。本节重点讨论电化学阻抗谱（EIS），它是一种有效的方法用以检测免疫复合物修饰电极的性质。第152页,共166页，2024年2月25日，星期天EIS实验中，在电化学体系中固定的直流电位上施加一个小幅（5~10mV峰间距）正弦波电位信号。根据Ohm定律，通过施加的正弦电位和检测到的正弦电流可以绘制阻抗谱。由于正弦电位和电流无论在大小和相等方面均不同，它们的合成阻抗，Ｚ，对频率（ω）的函数通常用实部（ZRe）和虚部（ZIm）来表示：第153页,共166页，2024年2月25日，星期天图4.17电化学免疫传感器发生氧化还原反应时界面性质的等效电路图其中RS指电解质溶液