乳中抗生素的检验.ppt

班级：10食检二班

姓名：马兰

引言

随着抗生素在乳畜饲养业中的广泛应用，牛奶中抗生素残留问题日益受到国际社会的重视。对此，检测技术也迅速发展，以寻求简便、快速、准确、敏感性高的检测方法满足日趋严格的残留限量要求，保障人们饮用牛奶的卫生和安全。

牛奶中抗生素残留的来源

一般认为，对泌乳牛用药不当或不注意安全时间是牛乳中抗生素残留的重要因素，尤其是使用乳房灌注法治疗乳腺炎时，易造成牛乳中抗生素残留。在牛饲料中添加饲料添加剂已十分普遍，其中含有一定比例的抗生素，主要作用是预防疾病，这是牛奶抗生素残留的重要原因。此外，一些不法交奶户在高温季节为防止乳的酸败，往往向牛乳中掺杂各种抗生素，这也是乳中抗生素残留的一个来源。1983年，Egan调查表明，用经抗生素治疗的乳牛用过的挤乳器给正常乳牛挤乳，可使正常牛的乳中残留抗生素，所以挤乳是乳中抗生素残留的另一个来源。

我们的家~~

牛奶中抗生素残留的危害

加工上不能用于生产发酵乳

对饮用者的健康不利

微生物检测法

微生物检测法是应用较广泛的方法，其测定原理是根据抗生素对微生物的生理机能、代谢的抑制作用,来定性或定量确定样品中抗微生物药物残留，如纸片法（PD）、TTC法、拭子法（STOP）等。采用传统的微生物检测方法，缺点是：(1)时间长；(2)显色状态判断通过肉眼辨别，易产生误差，对微红色者无法做出准确判断；(3)操作复杂。优点是费用低，一般实验室都能操作。其中，纸片法和TTC法是牛奶中药物残留检测的两种常用的微生物检测法。

什么是TTC检测法？

TTC法，即氯化三苯基四氮唑法(tripheyetetrazoliumchloride)，是目前我国食品卫生标准中规定的检查牛乳中抗生素残留的检测方法(GB5409—85)。该法简便、快速，无需特殊设备，3～4h可见报告，很适合牧场、乳品厂及食品卫生检测部门采用。

检验所需器材

菌种、培养基和试剂

菌种:嗜热乳酸链球菌。

脱脂乳:经113℃加热灭菌20min。

4%2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液:称取1gTTC,溶于5mL灭菌蒸馏水中,装褐色瓶内于7℃冰箱保存,临用时用灭菌蒸馏水稀释至5倍。如遇溶液变为玉色或淡褐色,则不能再用。

仪器用品

水浴锅、培养箱、不锈钢锅、温度计、蜡笔、试管架、1ml和10ml的灭菌吸管、灭菌试管

TTC检测法实验原理

嗜热乳酸链球菌对多种抗生素都很敏感，故可用于多种抗生素的残留量检验。乳中有抗生素存在，则检样中虽加入菌液培养物，但因细菌的繁殖受到抑制，因此指示剂TTC不还原，不显色。与此相反，如果没有抗生素存在，则加入菌液即行增殖，TTC被还原而显红色，也就是说检样呈乳的原色时为阳性，呈红色为阴性，见表1。

显色状态

判断

未显色者

阳性

徽红色者

可疑

桃红色至红色者

阴性

80℃，加热5MIN

报告

报告

抗生素阴性

显色者抗生素阳性

36±1℃水浴30MIN

显色者抗生素阴性

红色

不显色

加TTC指示剂，36±1℃水浴30MIN

加菌液，36±1℃水浴2h

冷却37℃以下

检样

将菌种移种脱脂乳,经36±1℃培养15h后,以灭菌脱脂乳1:1稀释待用

取检样9mL,置15mm×150mm试管内

加菌液1mL

加TTC0.3mL

阳性对照管

阴性对照管

无抗生素的乳8mL加抗生素及菌液和TTC

无抗生素乳9mL加菌液和TTC

对比

对比

TTC检测法实验结果

准确培养30min观察结果,如为阳性,再继续培养30min作第二次观察。观察时要迅速,避免光照过久发生干扰。检测各种抗生素的灵敏度见表2。

抗生素名称

最低检出量

青霉素

0.004单位

链雹素

0.5单位

庆大霉素

0.4单位

卡那霉素

5单位

注意事项

配制培养基应注意的问题

嗜热链球菌的保存

结束语

综上所述，鉴于牛奶中抗生素残留是涉及人类健康的公共卫生问题，应重视和加强检测工作，并努力研究发展一些简单、快速和便携化的筛选多残留分析技术；发展高效、高灵敏的联用技术和多残留组分确证技术；实现分析过程自动化或智能化，以提高分析效率、降低成本，保证消费者的健康。

我们不要抗生素~~