细菌生化试验的原理.ppt

细菌生化试验的原理概念细菌在新陈代谢过程中进行着各种生物化学反应。因细菌种类不同，代谢过程中所产生的分解和合成产物也各不相同。利用生物化学的方法来检测细菌的代谢产物以鉴别细菌，称为细菌的生物化学反应试验，简称生化试验。一、糖类代谢试验（一）糖类分解试验原理大多数细菌都能分解糖类（糖、醇和糖苷），所产生的代谢产物有酸（甲酸、乙酸、丙酸、乳酸等）和气体（如H2、CO2等）及醛、醇、酮等。因不同细菌含有不同的酶类，对糖类的分解能力各不相同，其产物也不一样。有的细菌能分解某些糖类而产酸产气；有的只能产酸而不产气；有的则不能分解糖类。一、糖类代谢试验（一）糖类分解试验指示剂最常用溴甲酚紫，培养基pH值低于5.2呈黄色，pH值高于6.8呈紫色。结果产酸产气时，记为“⊕”，培养基内的指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，倒置的小试管内出现气泡；只产酸不产气时，记为“+”，培养基呈黄色；不分解者，记为“-”，培养基颜色无变化（仍为紫色）。一、糖类代谢试验（一）糖类分解试验接种前接种后阳性（+）阴性（-）一、糖类代谢试验（二）甲基红试验（MR试验）原理有些细菌分解葡萄糖产生大量的酸，使培养基pH值维持在4.4以下；有些细菌产酸较少或产酸后很快转化为其它物质（如醇、醛、酮、气体和水），使培养基的pH值在6.2以上。一、糖类代谢试验（二）甲基红试验（MR试验）指示剂甲基红，培养基pH值低于4.4呈红色，pH值高于6.2呈黄色。结果红色为阳性，黄色为阴性，橘红色为弱阳性。一、糖类代谢试验（二）甲基红试验（MR试验）接种前接种后阳性（+）阴性（-）一、糖类代谢试验（三）V-P试验原理有些细菌在发酵葡萄糖产生丙酮酸后，使丙酮酸脱羧，形成中性的乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被空气氧化为二乙酰。二乙酰能与蛋白胨中精氨酸所含的胍基反应，生成红色化合物。若培养基中胍基含量较少，则可加入少量含胍基的化合物，如肌酸或肌酐。实验时加入α-萘酚可加速反应。一、糖类代谢试验（三）V-P试验结果红色为阳性。二、蛋白质类代谢试验（一）靛基质试验（吲哚试验）原理有些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸而产生靛基质（吲哚），靛基质与对二甲氨基苯甲醛结合，形成红色的玫瑰靛基质。结果产生红色为阳性，培养物不变色（仍为淡黄色）为阴性。二、蛋白质类代谢试验（二）硫化氢试验（H2S试验）原理有些细菌能分解蛋白质中的含硫氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等），产生硫化氢（H2S）。硫化氢可与铅或亚铁离子反应生成黑色的硫化铅或硫化亚铁。结果培养基变黑色为阳性，不变色为阴性。二、蛋白质类代谢试验（二）硫化氢试验（H2S试验）接种前接种后阳性（+）阴性（-）二、蛋白质类代谢试验（三）明胶液化试验原理天然存在的蛋白质因分子太大不能进入菌体细胞，细菌为利用这些蛋白质必须先借助蛋白水解酶将其分解为较小的组分（多肽）。有些细菌在代谢过程中能产生明胶（酶蛋白水解酶）并分泌到菌细胞外，消化或液化明胶。结果培养基液化为阳性，不液化为阴性。**