双分子荧光互补实验（BiFC）.pdf

2023/5/221:34双分子荧光互补实验（BiFC）

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双分子荧光互补实验（BiFC）

双分子荧光互补（Bimo-lecularfluorescencecomplementation，简称BiFC）技术巧妙地将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），

将这两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白分子，在激发光

的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。

背景说明

Hu等在2002年最先报道了一种直观、快速地判断目标蛋白在活细胞中的定位和相互作用的新技术——双分子荧光互补（Bimo-lecular

fluorescencecomplementation，简称BiFC）。该技术巧妙地将荧光蛋白分割成两个不具有荧光活性的分子片段（N-fragment、C-fragment），将这

两个荧光蛋白的片段分别融合两个目标蛋白A、B，如果A与B蛋白发生了相互作用，在空间上互相靠近，就会重新构建成完整的具有活性的荧光蛋白

分子，在激发光的激发下，荧光蛋白发出荧光。反之，若A与B蛋白之间没有相互作用，则不能被激发岀荧光。

图双分子荧光互补实验原理

注：A和B表示两个可以互作的蛋白。

在绿色荧光蛋白GFP的基础上，也衍生出蓝色荧光蛋白BFP，青色荧光蛋白CFP和黄色荧光蛋白YFP等，这些荧光蛋白都可以用于BiFC实验。

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图使用BiFC实验检测SDEL1/2与SPX4之间的相互作用（Ruanetal.,2019）。

服务流程

客户在线下单—订单/实验材料确认—全基因合成或者基因克隆（如果客户未提供测序完成的目标基因）—CloneCAD实验设计—BiFC载体构建—瞬时

转化/激光共聚焦观察（可选项）

服务内容及说明

适用场景

1、验证蛋白质之间是否存在相互作用，可与酵母双杂、Co-IP等实验结果相互验证；

2、BiFC实验还能对细胞内蛋白相互作用的位置进行研究。

BiFC技术的优点

1、适用于体内和体外蛋白相互作用的验证；

2、实验中的蛋白处于天然状态，并能直观观察蛋白相互作用在细胞中的定位；

3、实验周期短；

4、相对于FRET和BRET技术对仪器的要求高、数据处理复杂的情况，BiFC只需要荧光倒置显微镜，数据处理简单，只检测荧光的有无，背景干净，

检测更灵敏，不依赖于其他次级效应；

5、还可以用于研究蛋白之间的弱相互作用或瞬间相互作用；

6、不需要蛋白有特别的理论配比，能检测到不同亚群蛋白间的相互作用。

BiFC技术的缺点

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1、对系统温度敏感，