实验三-抗菌药物敏感性试验(药敏试验).pptx

抗菌药物敏感性试验（药敏试验）;内容;目的;药敏试验原理;;;MIC的对数与抑菌环直径关系

——近似线性负相关;;青霉素G;磺胺异恶唑;试验方法—纸片扩散法;

培养基非苛氧菌用Mueller-Hinton（M-H）琼脂

药物纸片直径6mm纸片，每片吸水量约20μl

菌液比浊管0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管，菌液浓度为1.5×108/ml

质控菌株

大肠杆菌;;菌液制备挑取已纯化的4~5个菌落制备菌悬液

挑选琼脂平板上3~5个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部

转移至4~5mL适宜的液体培养基中（如胰酶消化大豆胨肉汤）;;

从孵育16-24h的非选择性琼脂培养基上用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮于生理盐水或肉汤中震荡混匀

与标准比浊管比浊，以有黑字的白纸为背景调整其浊度相当于0.5号麦氏管。;;用无菌棉拭子蘸取菌液

在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分

用拭子涂布整个培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60°

最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀;;

将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干燥3-5min使平板上的水分被琼脂完全吸收。

用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。直径90mm的平板最好贴6张。;15min内将平板倒置放温箱孵育。;;;;可用直尺或游标卡尺，读取最接近的整毫米数

测量时应将尺子置于倒置的平板上，置平板在黑色无反射光背景上方几厘米处并用反射光照明。

含血的药敏琼脂应移去平板盖后用反射光照明平板，于表面上方测量抑菌环。;测量抑菌环直径时抑菌环边缘以见不到细菌明显生长为限，测量的是完全抑制的区域直径（包括纸片直径）

按抑菌环直径判断细菌的敏感性，应依据CLSI的解释标准，报告细菌对测试药物敏感、中介、耐药。;;;;;报告方式;;;;;;沙门菌属的肠道外分离株应测试并报告氯霉素和一种三代头孢菌素的敏感性

肠球菌对头孢菌素类、氨基糖甙类、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶和克林霉素在体外可能有活性但临床耐药，不能报告敏感。;MRS应报告耐受所有β-内酰胺类药物（包括其复合药）

从威胁生命的感染（脑膜炎、??血症、会厌炎和面部蜂窝组织炎）患者的血和脑脊液中分离的流感嗜血杆菌常规应报告氨苄西林、一种三代头孢菌素和氯霉素的药敏结果。;“警告”下列抗生素/微生物组合，在体外可出现活性;适用于肠杆菌科细菌等快速生长的致病菌

无论哪种接种方式，只要质控菌种的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告药敏结果

为WHO推荐药敏方法

专性厌氧菌及酵母样菌等某些特殊菌种药敏试验不能用;技术简单，试剂量低，不需要特殊设备，可自由选择抗菌药物，可重复，易于由人判断，故必须标准化。

纸片法药敏试验必须标准化