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人巨细胞病毒UL145及UL13基因转录特点和转录本结构研究的开题报告

一、研究背景与意义

人巨细胞病毒（HCMV）是致病性强、传播广泛的β-疱疹病毒科病毒，可引起危害婴幼儿健康的先天性感染和免疫缺陷患者的致命性感染。HCMV基因组由~230kb的双链DNA构成，编码200余个基因，其中可能有50%以上的基因是具有未知功能的。因此，对HCMV基因组中未知功能基因的研究，有助于深入理解HCMV的致病机制和生物学特性。

UL145和UL13是HCMV基因组中两个未知功能基因。UL145编码的蛋白质是一个约22.6kDa的蛋白质，其缺失型病毒与野生型病毒相比，病毒复制减缓，并且在感染初期病毒产量降低。UL13编码的蛋白质是一种丝氨酸/苏氨酸激酶，其缺失型病毒的病毒感染能力也会受到影响。虽然UL145和UL13参与HCMV感染和复制过程中发挥了重要的生物学功能，但目前对这两个基因的具体转录特点和转录本结构等方面的研究还较少。

因此，开展UL145和UL13基因的转录特点和转录本结构研究，有助于进一步探究HCMV的基因调控机制，揭示HCMV感染的分子机理。也为相关的抗病毒药物的研发提供科学基础。

二、研究内容及方法

1.研究内容

（1）对UL145和UL13基因的转录起始位点（TSS）进行鉴定，并分析转录起始区域的启动子结构。

（2）使用普通PCR和实时PCR等技术，检测UL145和UL13基因的转录量，并分析不同细胞系和病毒株系中的转录水平差异。

（3）开展核糖核酸聚合酶（RNApolymerase）定点扫描分析，鉴定UL145和UL13基因可能的剪接变体。

2.研究方法

（1）应用反转录PCR（RT-PCR）和5’RACE等技术鉴定UL145和UL13基因TSS及其启动子结构。

（2）利用普通PCR和实时PCR技术对不同类型的HCMV感染细胞中的UL145和UL13基因进行定量检测。

（3）开展RNApolymerase定点扫描分析，筛选UL145和UL13基因的可能剪接变体。并通过Sanger测序和生物信息学分析等技术验证。

三、研究预期结果

（1）鉴定UL145和UL13基因的TSS和启动子结构，并分析其转录起始区域的启动子结构。

（2）分析不同类型的HCMV感染细胞中UL145和UL13基因的转录水平差异，初步探究其编码蛋白质表达的调节机制。

（3）发现可能的UL145和UL13基因的剪接变体，并初步探究可能的差异表达功能。

四、研究意义

（1）揭示HCMV感染的分子机理和基因调控机制，有助于深入了解HCMV的致病机制和生物学特性。

（2）为探索相关抗病毒药物的研发提供重要的科学基础。