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MicroRNA靶向Id1对BMSCs成骨分化的影响中期报告

材料与方法：

1.内容：利用invitro体外细胞培养模型，采用骨髓间充质干细胞(BMSCs)进行实验，模拟条件下，利用qPCR、Westernblot、ALP活性定量法、Alizarin红染色等方法，研究microRNA靶向Id1对BMSCs成骨分化的影响。

2.实验过程：

(1)倒置荧光显微镜下BMSCs观察培养情况；

(2)qPCR检测BMSCs中miR-200c和Id1mRNA的表达情况；

(3)将miR-200c-mimic、miR-200c-antagomir、si-Id1和对照组分别转染到BMSCs中，利用Westernblot检测Id1和成骨分化标志物ALP和OCN的表达情况；

(4)用ALP活性定量法检测BMSCs成骨分化的活性；

(5)使用Alizarin红染色检测BMSCs成骨分化程度。

预期结果：

(1)在BMSCs中，miR-200c表达水平下降，Id1mRNA表达水平升高；

(2)miR-200c-mimic转染组下调Id1蛋白表达水平，继而带动ALP和OCN蛋白表达水平升高，促进BMSCs成骨分化；

(3)miR-200c-antagomir转染组上调Id1蛋白表达水平，带动ALP和OCN蛋白表达水平下降，抑制BMSCs成骨分化；

(4)si-Id1转染组下调Id1蛋白表达水平，带动ALP和OCN蛋白表达水平下降，抑制BMSCs成骨分化。

结论：

miR-200c靶向Id1表达水平，调节BMSCs成骨分化。这些研究结果有助于深入了解BMSCs的成骨分化机制，为治疗骨代谢异常相关性疾病提供新的治疗途径。