M5HiPer农杆菌EHA105感受态细胞使用说明书.pdf

M5HiPer农杆菌EHA105感受态细胞

使用说明书

产品名称单位货号

M5HiPer农杆菌EHA105感受态细胞100hlx10支“MF860-10

M5HiPer农杆菌EHA105感受态细胞“100ulx20支_MF860-20

【储存条件】-70*C恒温保存，避免反复冻融，有效期六个月;干冰运输。

【产品简介】

农杆菌EHA105(pSoup)菌株由EHA105菌株改造而来，为C58型背景，核基因中含有利福平抗性筛选基因rif。此菌株携带一无自身

转运功能的琥珀碱型Ti质粒DEHA105(pTiBo542DT-DNA)}，此质粒含有vir基因《vir基因是TDNA插入植物基因组必需的元件，

PEHA105(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的下DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体TDNA顺利转移)。一些缺失农杆菌复

制相关元件(如pVS1的复制起点REP区或pVS1质粒的STA区)的表达质粒如pGreen,pGreenll-62SK和PGs2等不能在EHA105

菌株中繁殖。PSoup辅助质粒可以帮助这些不完整双元表达质粒在农杆菌中的复制。EHA105(pSoup)菌株具有四环素〈Tet)抗性。

EHA适用于水稻、烟基因操作。经植物表达质粒PGs2检测，转化效率可达103cfu/hg，-70C保存12个月

转化效率不发生改变。

【基因型】C58ffP)万PEHA105fpTiBo542DTDNA)(sfrepR)SuccinamopinepSoup(ietP)

【使用方法】

按照无菌操作规程进行下列操作步骤;

1.取-70C保存的EHA105(pSoup)农杆菌感受态细胞于冰水浴中融化;

2.无菌条件下，向感受态细胞中加入100ng-1bg质粒DNA(第一次使用，最好做一下预实验，确定所加质粒的最佳量)，轻轻混匀，

冰水浴中静置5分钟;

3.将离心管置于液氟中速冻5分钟;《注:可用干冰和无水乙醇混合物代蔡液所)

4.然后快速将离心管填于37C水浴中保持5分钟，不要晃动水面;

5.将离心管放回冰水浴中，冰浴5分钟;

6.无菌条件下加入800bl无抗生素的2XYT、SOB、SOC或LB液体培养基，于28C振荡培养2-3小时，菌体复苏;

7.6000rpm离心1分钟收茵，留100bl左右上清，轻轻吹打重悬菌体，取适量菌液，涂布于相应抗生素的LB平板上，于28C培养箱

中倒置培养48-72小时。《实验表明当平板只含有50hgiml的Kan时，28C培养48h即可看到菌落;平板中含有50hg/mlKan和

20bgymlRif时，需28C培养60h可看到菌落;如果平板中含有50bgimlKan和50hgimlRif时则需要28C培养72-90h可看到苗

落)。