免疫学检测技术及在食品中的应用.ppt

检测线质控线吸收垫样品垫硝酸纤维素膜胶体金垫背衬（底板）胶体金试纸条示意图第41页,共62页，2024年2月25日，星期天2.3分类间接法----测抗体双抗夹心法----测大分子抗原----食品中沙门氏菌的检测竞争法----测小分子抗原----食品中瘦肉精、黄曲霉毒素的检测第42页,共62页，2024年2月25日，星期天沙门氏菌单克隆抗体可能含有沙门氏菌的样品（1）双抗夹心法检测抗原——测大分子抗原沙门氏菌多克隆抗体抗抗体第43页,共62页，2024年2月25日，星期天第44页,共62页，2024年2月25日，星期天（2）思考竞争法的原理？检测线喷的是纯化的抗原，与待检测抗原竞争这种情况下的结果判定？第45页,共62页，2024年2月25日，星期天2.4胶体金快速诊断技术的特点简捷快速：操作简单，一般只要5-10min就会出结果，而其它方法如ELISA需要1-2h，PCR需要时间更长。结果易于判定：阴、阳性呈色很明显，肉眼很容易判断。特异性好：因为该技术大多用单克隆抗体标记，这决定了它具有很好的特异性。第46页,共62页，2024年2月25日，星期天2.5技术分项样品垫吸水垫粘性底板NC膜胶体金垫干燥方法抗原抗体生物原料胶体金制备标记技术溶液喷点溶液体系分析装配\切条\包装第47页,共62页，2024年2月25日，星期天（1）金标垫与样品垫的处理1，金标垫裁剪成长10㎝，宽8㎜长条2，样品垫裁剪成长30㎝，宽2.5㎝长条3，将裁剪好的金标垫与样品垫，分别用金标垫处理液与样品垫处理液浸润，放入37℃温箱中烘干储存在干燥器中置4℃冷库中备用。第48页,共62页，2024年2月25日，星期天抗体Antibody来源差异:鼠抗,兔抗和羊抗种类差异:单抗,多抗腹水的处理:饱和硫酸铵沉淀法特异性:亲和层析柱浓度:浓缩溶解液:不含盐,例如PB（2）抗原抗体生物原料抗原Antigen偶联抗原物质:BSA,OVA等毒品检测来源:合成抗原第49页,共62页，2024年2月25日，星期天（3）标记技术Conjugate容器硅化处理金颗粒制备(负电)颜色与颗粒的关系.最佳标记颗粒大小40nm.蛋白质最适用量测定:盐析法第50页,共62页，2024年2月25日，星期天（4）胶体金制作流程1，向硅化过的三角瓶中加入100ml去离子水，再加入1ml浓度为1%的氯金酸2,将三角瓶放入微波炉中加热，沸腾时取出，一次性迅速加入1850μl浓度1%柠檬酸三钠，摇动约20s（柠檬酸三钠经0.22滤膜过滤）3,再将三角瓶放入微波炉中大火1分钟，调中火继续加热五分钟。4，拿出来冷却，待温度降至室温时用去离子水补足到100ml,用0.1M的碳酸钾调节PH至略高于待标记蛋白的等电点，0.22过滤转移至硅化过的平底蓝盖瓶中。第51页,共62页，2024年2月25日，星期天5，蓝盖瓶中放入搅拌子，搅拌，向金溶液中加入蛋白,标记量为2μg/ml，缓慢加入标记蛋白。6,搅拌,半小时后加入浓度为10%的BSA至终浓度为0.2%，继续搅拌一小时。7，将标记好的溶液转至50ml离心管中，3500rpm/min，4℃离心30min.弃去沉淀，收集上清。第52页,共62页，2024年2月25日，星期天8，上清转入另外的50ml离心管中，7500rpm/min，4℃离心30min,弃上清收集沉淀。9，用1/2原体积的洗涤液洗涤沉淀，7500rpm/min，4℃离心30min,弃上清收集沉淀。10，用十分之一原体积的重悬缓冲液重悬沉淀。11，重悬后的胶体金转入硅化过的蓝盖瓶。第53页,共62页，2024年2月25日，星期天（5）溶液喷点---喷点溶液Dispensing

(BIODOTXYZ系列喷点仪器)C\T线溶液前处理:1.过滤,0.2um孔径滤膜2.离心1万转10分钟喷点过程头尾去除,喷点中的报废标志C\T线喷点工艺(BJQ3000喷头)与接触划点(FL1000XY喷头)工艺比较第54页,共62页，2024年2月25日，星期天（6）装配\切条\包装Lamination装配切条(演示:BIODOTCM4000切条机)刀的维护与清洁底板选择(胶的影响)包装第55页,共62页，2024年2月25日，星期天（7）灵敏度问题源头:抗原抗体免疫反应材料问题—NC膜附加物质的解决办法假阳性的解决批内\批间差第56页,共62页，2024年2月25日，星期天（8）长期保存试纸失活