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DNA的粗提取与鉴定

实验说明：本实验是高中生物学选择性必修中的实验。实验分

3

为提取和分离两个步骤，实验过程相对简单，现象也很明显。本实验

是在学习了“重组DNA技术的基本工具”后，在学习“基因工程的

基本操作程序”前进行的学习，旨在让学生通过提取和鉴定直观的感

受DNA在细胞中的存在，并对DNA的物理和化学性质进行深入的

了解。DNA可以提取到细胞外，也就可以通过各种工具在体外完成

酶切及拼接的过程，使学生可以更好的理解基因工程体外操作的可行

性。

一、实验目的：

1.了解DNA的物理和化学性质，理解DNA粗提取和鉴定的原理。

2.学会DNA粗提取的方法以及用二苯胺试剂对DNA进行鉴定。

二、实验原理：

1.DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。

2.DNA在不同浓度的NaCI溶液中溶解度不同，它能溶于2mol/L

的NaCI溶液。

3.DNA遇二苯胺试剂在沸水中会呈现蓝色。

三、实验材料：

新鲜洋葱（也可以选择香蕉、菠菜、菜花、鸡血或猪肝等作为实

验材料，提取DNA的方法可能稍有不同，植物材料需要研磨破坏细

胞，动物材料加清水使其吸水涨破）、研磨液（配方附后）、体积分

数为95%的酒精、2mol/L的NaCI溶液、二苯胺试剂和蒸馏水等。

四、实验用具：

烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、双层纱布、漏斗、试管、试管架、

试管夹、酒精灯、陶土网、三脚架、火柴、刀和天平等。

、方法步骤：

称取约洋葱，切碎，然后放入研钵中，倒入研磨液，

1.30g10mL

充分研磨。

在漏斗中垫上纱布，将洋葱研磨液过滤到烧杯中，在℃箱

2.4

中放置几分钟后，再取上清液。也可以直接将洋葱研磨液倒入塑料离

心管中，在1500r/min的转速下离心5min，再取上清液放入烧杯中。

3.在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液（体积分数为

95%），静置2~3min，溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。

用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分；

或者将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心5min，

弃上清液，将管底的沉淀物（粗提取的DNA）晾干。

4.取两支20mL的试管，各加入2mol/L的NaCI溶液5mL。将丝

状物或沉淀物溶于其中一支试管的NaCI溶液中。然后，向两支试管

中各加入4mL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热

5min。待试管冷却后，比较两支试管中溶液颜色的变化。

DNA的鉴定

步骤试管A试管B

2mol/LNaCl溶液5mL5mL

白色丝状物（粗提取的DNA）有无

现配二苯胺试剂4mL4mL

沸水浴5min5min

颜色变化蓝色不出现蓝色

六、实验结论：

加入二苯胺沸水浴后若变蓝色，则说明提取物中含有DNA，且

颜色越深，DNA的含量越高。

七、注意事项：

1.如选择血液材料，为防止血液凝固，每100mL的血液中需加入

3g的柠檬酸钠。

2.不能选择哺乳动物的血液，因为哺乳动物血液中成熟的红细胞