动物细胞培养及核移植.ppt

3.下列属于动物细胞培养与植物组织培养主要区别的是A.培养基成分不同B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株A第32页,共42页，2024年2月25日，星期天4.在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到A.细胞培养技术B.细胞核移植C.胚胎移植技术D.基因工程技术D第33页,共42页，2024年2月25日，星期天5.世界上第一只克隆绵羊“多莉”的培育等程序如图所示。请仔细看图后回答问题：黑面绵羊去核卵细胞白面绵羊乳腺细胞核重组细胞早期胚胎另一头母绵羊子宫克隆绵羊多莉ab电脉冲处理妊娠、出生⑴写出ａ、ｂ所指的细胞工程各称：ａｂ。⑵实施细胞工程ａ时，所需的受体细胞大多采用动物卵细胞的原因是：。⑶多莉面部的毛色是，判断依据：。⑷继植物组织培养之后，克隆绵羊培育成功，证明动物细胞也具有。核移植胚胎移植卵细胞全能性较高白色遗传物质主要来自白面绵羊全能性第34页,共42页，2024年2月25日，星期天第35页,共42页，2024年2月25日，星期天为什么细胞培养要分散成单个细胞培养？怎样分散？1.成块的组织中细胞与细胞靠在一起，彼此限制了细胞的生长和增值。2.从健康动物体内取出组织块，剪碎，用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要成分是什么？用胃蛋白酶行吗？1.在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。2.动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。第36页,共42页，2024年2月25日，星期天动物细胞生长特性：细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。第37页,共42页，2024年2月25日，星期天什么是原代培养和传代培养？传代培养的细胞具有什么特点？原代培养：将动物组织用胰蛋白酶处理成单个细胞，配制成一定浓度的悬浮液，放入培养瓶中在培养箱中培养的过程传代培养：培养瓶中的细胞越来越多，用胰蛋白酶处理使细胞从瓶壁上脱离下来，配制成悬浮液，分瓶培养的过程第38页,共42页，2024年2月25日，星期天1．原代培养和传代培养的概念?

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从机体上获取的组织，通过酶或机械方法分散成单个细胞进行培养，在首次传代前的培养一般称为原代培养。原代培养的最大优点是：组织细胞刚脱离机体，生物性状尚未发生较大变化，在一定程度上能够反映体内的状态。原代培养的细胞在生长、繁殖一定时间后，由于空间不足或细胞密度过大导致营养枯竭，会影响细胞的生长，因此需要进行扩大培养，即传代或称为传代培养，也就是将细胞按1：2~1：4的比例传代。但严格说来，不论在进行传代时稀释与否，将细胞从一个培养瓶转移到另一个培养瓶即称为传代培养。?

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传代代数与细胞的世代（增殖代数）并不是同一个概念。在细胞培养时，所说的“第10代细胞”，仅指该细胞已经传代10次；细胞传一代后，一般能倍增3~6次，经过三个阶段，即潜伏期、指数生长期和平台期。当细胞达到平台期时，就需要进行传代培养，否则细胞会中毒，发生形态改变，甚至死亡。?第39页,共42页，2024年2月25日，星期天2．关于传代培养?

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在进行传代时，如果是悬浮细胞，只需简单稀释即可，若需完全更换培养液只需低速离心沉淀，再悬浮于合适的培养液中即可。一般细胞每毫升接种数量为5′104~8′105个，传代密度太低，细胞容易死亡，表现出细胞在达到增长前有较长的滞留期。在培养过程中，培养液会由于pH下降而呈现黄色，表明细胞已经达到最大密度需要换液或进行传代培养。如果是单层贴壁的细胞，等长满培养瓶表面，即可进行传代，多数细胞需用胰蛋白酶处理将细胞从生长物表面分离下来，以促进传代培养。?

第40页,共42页，2024年2月25日，星期天3．细胞系和细胞株?

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细胞系和细胞株，两者曾一度混用，导致有些文献中概念不清。下面所指的概念是现在国内外比较通用的，也是绝大多数研究者接受的观点。?

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原代培养物经首次传代成功即称为细胞系（Cell?Line），因此细胞系可泛指一般可能传代的细胞