动物细胞融合和单克隆抗体用.ppt

2010-3-26*关于动物细胞融合和单克隆抗体用2010-3-26*复习巩固：1.植物体细胞杂交2.植物组织培养第2页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*植物体细胞杂交植物细胞A植物细胞B原生质体A原生质体B原生质体融合杂种细胞组织培养杂种植株去细胞壁纤维素酶、果胶酶化学法物理法诱导第3页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*1.概念：动物细胞融合（cellfusion)，又称体细胞杂交（somatichybridiazation），是指两个或更多个相同或不同细胞结合形成一个细胞的过程。一、动物细胞融合融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞，称为杂交细胞。第4页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*2、动物细胞融合基本原理：与植物原生质体融合的基本原理相同，即细胞膜的流动性3、诱导方式物理法：化学法：生物法：灭活的病毒电激、振动、离心聚乙二醇（PEG）例如：仙台病毒第5页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面细胞膜被病毒颗粒穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞（细胞膜具有一定的流动性）生物法：灭活的病毒（丧失感染性、保留抗原结构）第6页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*病毒促使细胞融合的主要步骤如下：两个原生质体或细胞在病毒黏结作用下彼此靠近；通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透；两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。第7页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*4、过程：动物细胞A动物细胞B诱导，融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、诱导方法质融合、核融合）单核细胞第8页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*5、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能；广泛应用多个学科领域；重要用途：制备单克隆抗体。第9页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*6、植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合细胞融合原理细胞融合的方法诱导方法用途制备单克隆抗体获得杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞的全能性去除细胞壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒第10页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*2、什么是抗体？二、单克隆抗体回顾3、抗体的分布？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。主要分布在血清中。1、什么是克隆？“克隆”从英文“clone”音译而来，是指从一个共同祖先，通过无性繁殖的方法产生出来的一群遗传特性相同的DNA分子，细胞或个体。在细胞水平指动物细胞培养.第11页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆）形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体。1、单克隆抗体概念:第12页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*该法制备抗体的特点：产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。自主阅读P52：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？思考：如何大量获取某种特定抗体？第13页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*B淋巴细胞特点：３.每一个B淋巴细胞只能产生一种抗体。１.B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。２.动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。第14页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-26*怎样才能大量生产单克隆抗体？提示1：仅用细胞培养技术可行吗？提示2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示3：有什么方法能使B细胞产生抗体的能力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？第15页,共26页，2024年2月25日，星期天2010-3-2