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儿童感染流感嗜血杆菌分子生物学鉴定及分型研究的开题报告

一、研究背景与意义

嗜血杆菌（Haemophilusinfluenzae）是一种革兰氏阴性的杆状细菌，被广泛分布于人类和动物的上呼吸道和消化道等部位。其中，b型嗜血杆菌（Hib）是一种呼吸道致病菌，可引起儿童双侧肺炎、中耳炎、硬膜外脓肿、败血症等严重疾病，是5岁以下儿童死亡的常见病原体之一。流感病毒是一种不稳定的RNA病毒，通过在短时间内进行多起变异来使人体免疫系统无法迅速产生抗体，因此每年都有大量的人受流感病毒感染。

近年来，国内外儿童甲型流感、乙型流感、病毒性肺炎等呼吸道感染病例逐年增多，同时，儿童Hib病例也呈现不同程度的上升趋势。传统的细菌学方法难以对病菌进行鉴定及分型，因此，开展儿童感染流感和Hib分子生物学鉴定及分型研究，对于做出正确诊断和治疗具有重要意义。

二、研究内容和方法

（1）病例收集：在医院内部3年时间收集300份儿童痰液、鼻咽分泌物或血液样本。采用ELISA法对收集样本中的甲型流感病毒、乙型流感病毒抗原和Hib抗原进行检测。

（2）实验方法：

a.利用多聚酶链式反应（PCR）对检测出Hib阳性的样本进行检测，检测（caplocus、fucK、hpd）三个基因的特异性。通过PCR扩增出的目标基因序列进行测序，并进行生物信息学分析。

b.利用逆转录PCR技术对检测出甲型流感病毒和乙型流感病毒阳性的样本进行检测，确定病毒RNA的基因组序列。利用病毒蛋白质序列进行亲缘关系分析。

（3）结果分析：将实验结果与野生菌株进行比对分析，并寻找菌株之间的亲缘关系。

三、研究预期成果

本研究针对儿童感染流感嗜血杆菌进行分子生物学鉴定及分型，预期能够得到以下成果：

（1）明确病原体的种类和分布情况，为以后对病原体的防控提供参考;

（2）利用分子生物学技术分析Hib和流感病毒目标基因序列，在菌株间建立亲缘关系，更好地指导疫苗研发和疾病防治。

（3）为临床医学提供依据，提高诊断准确性和治疗效果。

四、研究进度安排

（1）2022年3月20日前完成开题报告；

（2）2022年4月1日～6月30日完成实验设计和方案制定；

（3）2022年7月1日～2023年6月30日进行实验操作和数据分析；

（4）2023年7月1日～8月31日完成论文撰写和论文答辩准备工作。