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实验二十二 胡萝卜素的柱层析分离

【目的】

1、掌握层析法的基本原理

2、了解柱层析分离法在生物化学中的应用

【原理】

胡萝卜素存在于辣椒和胡萝卜等植物中，因其在动物体内变成维生素 A故又称维生素A原，胡萝卜素可用酒精、石油醚和丙酮等有机溶剂从食物中提取出来，且

能被氧化铝(A1O)所吸附。由于胡萝卜素与其他植物色素的化学结构不同，它们被

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氧化铝吸附的强度以及在有机溶剂中的溶解度都不相同，故将提取液用氧化铝（固定

相）吸附，再用石油醚（流动相）等冲洗层析柱，即可分离成不同的色带。同溶质的其它色素比较，胡萝卜素吸附最差，跑在最前面，故也最先被洗脱下去，且可分成两种胡萝卜素（α

-胡萝卜素、β-胡萝卜素）

【器材】

研钵、分液漏斗、层析管等。

【试剂】

1、95%乙醇

2、石油醚

3、1%丙酮-石油醚

2 34、氧化铝（AlO

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5、无水硫酸钠

【操作】

1、提取

取烘干的红辣椒皮3~4个，剪碎后放入研钵中，加95%乙醇4ml，研磨至提取液成深红色，在加石油醚6ml研磨3~5分钟，研磨中可酌情再加石油醚10ml左右。用纱布将提取液直接滤入分液漏斗中，用30ml蒸馏水洗涤三次，直至水层透明为止（为除去提取液中的乙醇）。将红色的石油醚倒入干燥的试管中，加入少量无水硫酸钠除去水分，用软木塞塞紧以免石油醚挥发。

2、层析柱的准备

将玻璃层析管（底部有过滤垫），装入氧化铝（Al2O3）粉末约10cm高度，于其上铺一

张圆形的小滤纸。将管垂直夹在铁夹上备用。

3、层析

用滴管吸取约2ml石油醚，沿管壁加入层析柱，当层析柱上端石油醚即将但尚未完全浸入氧化铝时，即用滴管吸取石油醚提取液1.0ml沿管壁加入层析柱。待提取液全部浸入层析柱，立即加入含1%丙酮的石油醚冲洗，使吸附在柱上端的物质逐渐展开成为数条颜色不同的色带。

【结果及分析】

观察色带的位置、宽度与颜色深浅，尤其注意两条胡萝卜素的色带。

【注意事项】

1、研磨红辣椒皮要快而充分。

2、石油醚提取液中的乙醇必须洗净，否则吸附不好，色素的色带弥散不清。

3、装柱要均匀、无断层、柱表面要水平（边装柱边振动）。

4、辣椒皮、层析柱、研钵、带塞试管应充分干燥

2 35、氧化铝（AlO

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6、同一组两个同学注意分工合作

7、在加入洗脱液时应沿管壁均匀加入，使层析结果平直。

8、滤纸片大小应合适。

【思考题】

1、本实验中的固定相和流动相各是什么？

2、层析时能否用水冲洗，为什么？