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医学免疫学实验指导

实验十三 免疫浊度试验

由长沙达尔锋生物科技有限公司整理

【文章介绍】

实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。

BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。

【实验目的】

掌握免疫浊度测定的原理，熟悉其操作方法，了解其应用及意义。

【实验原理】

抗原和抗体在液相中反应，所形成的免疫复合物使液相出现浊度，复合物的量与浊度呈正相关。这种浊度可以反射、散射和吸收入射的光线，使入射光衰减，因此可通过测定透射光衰减（以A值表示）或散射光强度来检测抗原抗体反应。本实验以常用透射比浊法检测人血清IgG为例。在反应系统中IgG抗体过量时，所形成的免疫复合物与血清IgG量呈正相关，而形成的浊度大小与入射光的衰减呈正相关，因此测定A值反映液相中的抗原量，通过参照标准曲线或标准品数值的计算，即可得知待测血清中IgG含量。

【实验用品】

标本：待测人血清、标准血清（混合正常人新鲜血清）、人IgG标准品（或冻干人血清IgG参考标准）。

PEG溶液：PEG6000-80004.0g、NaF1.0g、Na2HPO4?12H2O10.15g、NaH2PO4

2H2O1.0g、NaN30.1g，加蒸馏水至100ml。

其他试剂：羊抗人IgG抗血清、生理盐水、蒸馏水。

主要器材：分光光度计（721或731等）、水浴箱、微量移液器、刻度吸管、试管等。

【步骤和方法】

系列标准管准备：用生理盐水稀释人IgG标准品或人血清IgG工作标准，使其浓度分别为5.5g/L、11.0g/L、22.0g/L、44.0g/L（浓度可根据不同制剂略有变动）。取上述IgG标

准液10μl，分放于4个试管中；另取生理盐水10μl，放于第5只试管中，作为空白对照。分别做好标记。

血清管准备：将待测血清和标准血清均做1:10稀释（0.1ml血清+1.0ml生理盐水），各取10μl，分放于预先标记的试管中。

抗体制备：用PEG溶液稀释羊抗人IgG抗血清，注意保持适宜的抗体浓度。

抗原抗体反应：向各标准管和血清管中分别加入稀释抗血清，混匀后至37℃水浴30min。

测定：用分光光度计进行测定，使用340nm波长，用生理盐水校正零点。逐次测定各标准管和血清管，准确读取和记录各自的A值。

【结果和评价】

以4个浓度的IgG标准品的A值为纵坐标，以其分别的IgG含量为横坐标，绘制出标准曲线。各血清管IgG含量可从标准曲线上查得。标准血清的IgG含量应该处于正常参考值的范围以内，否则应考虑实验结果可能有问题。

也可用分段直线计算法得到结果，举例如下：

标准管序号

1

2

3

4

标准管IgG含量（g/L）

5.5

11.0

22.0

44.0

标准管A值

0.04

0.08

0.14

0.26

血清管A值

0.10

以上例子中，血清管的A值位于标准管1和标准管3之间，计算如下：

（22.0-11.0）/(0.14-0.08)×（0.10-0.08）+11.0=14.7(g/L)

正常血清IgG参考值8.0-16.0g/L。

【注意事项】

由于不同制品羊抗人IgG抗血清的效价不同，所以对每批制品都需要测定最适宜的抗体浓度。

PEG的分子量不同，性质也有所区别；PEG溶液浓度不同所沉淀的免疫复合物也不同，

浓度越大沉淀的复合物越小。20g/L浓度只能沉淀较大复合物，40g/L浓度可沉淀较小复合物，但浓度＞50g/L，PEG选择性沉淀免疫复合物的特征即行消失。

【临床意义】

血清IgG降低，主要见于先天性低IgG血症，例如Bruton型免疫球蛋白缺乏症和联合免疫缺陷病等。亦可见于获得性低免疫球蛋白血症，常低于5.0g/L,例如剥脱性皮炎、肠淋巴管扩张症、肾病综合征、淋巴肉瘤、霍奇金病等。

血清IgG升高，主要见于各种感染性疾病、肝脏疾病（慢性活动性肝炎、原发性胆汁型肝硬化等）和自身免疫病等。

【思考题】

免疫浊度实验的原理及试验中的主要注意事项是什么?

血清IgG异常时涉及哪些疾病?